8.2.3.
Una mutazione del Gene dell’otoferlina OTOF (DFNB9) provoca DFNB9, una forma
non sindromica di sordità,
%26safe%3Dactive%26rlz%3D1C2KMZB_enIT515IT523%26biw%3D1056%26bih%3D920&rurl=translate.google.it&sl=pt-BR&u=http://pt.wikipedia.org/wiki/Ficheiro:PBB_GE_OTOF_220492_s_at_tn.png&usg=ALkJrhhpe6T4UoBM9nGNHWqf_u8Ehxfi1A)
Le mutazioni del gene
dell’otoferlina sono responsabili della forma recessiva DFNB9. L’otoferlina è
una proteina che interviene nella regolazione delle vescicole presinaptiche
delle cellule cigliate interne La sordità è prelinguale di grado severo- profondo
.La particolarità di questa forma di sordità è che essa può presentarsi come
una neuropatia auditiva, con otoemissioni acustiche OAE inizialmente conservate
ABR assente. Starr [67] ha per primo utilizzato il termine di neuropatia
uditiva per designare nell’adulto delle sordità, spesso bilaterali, associate a
un’alterazione dei potenziali evocati uditivi (PEU) contrastante con la
presenza di otoemissioni acustiche (OEA) normali. Queste forme sono oggi meglio
conosciute nell’adulto e nel bambino e giustificano la valutazione delle
otoemissioni per individualizzarle nel corso della gestione di una sordità di
percezione. La frequenza di disordini uditivi attribuiti a neuropatia è
relativamente elevata fra i casi di neonati in terapia intensiva (1%). Fra
questi neonati la prevalenza di otoferlina anomala è probabilmente minoritaria.
L’importanza di una diagnosi molecolare nei casi di “neuropatia uditiva”
risiede nel fatto che i casi con anomalo otoferlina sono dei candidati
all’impianto cocleare con prospettive di un ricupero funzionale comparabile a
qualsiasi altra cocleopatia. Mutazioni in questo gene sono la causa di non
sindromica sordità neurosensoriale DFNB9 recessiva. La forma breve della
proteina codificata ha 3 C2 domini, un unico transmembrana dominio
carbossi-terminale trovato anche in fattore spermatogenesi di C.elegans, RES-1,
e anche in disferlina umana, mentre la forma lunga ha sei domini C2..
L’OTOFERLINA SINAPTICA ALTERATA E’ CAUSA DI SORDITA’
Ruolo dell’otoferlina nella
fisiologia sinaptica, è un’ulteriore prova dei rapporti fra questi studi di
base e la patologia.
Un
gruppo di ricerca guidato da Roux, nel laboratorio di Christine Petit, identificando
il ruolo dell’otoferlina nelle sinapsi delle cellule ciliate della coclea
(IHC), ha definito il processo alla base della grave forma di sordità causata
da alterazioni nel gene di questa proteina (Roux I., et al.,
Otoferlin, defective in a human deafness form, is essential for exocytosis at
the auditory ribbon synapse. Cell 127, 277-289,
2006).
Per
convertire la complessa struttura del suono in impulsi nervosi, le IHC devono
trasmettere segnali al nervo acustico secondo una codifica di alta precisione;
in tali processi sembrano avere un ruolo importante le loro speciali giunzioni
note come ribbon synapses, la cui configurazione molecolare è oggetto di
intensi studi, ma la cui fisiologia è ancora scarsamente nota. Impiegando
l’immunofluorescenza, Roux e i suoi colleghi hanno localizzato
l’otoferlina nelle IHC e, successivamente, con l’ausilio della immunogold
electron microscopy, hanno condotto uno studio ultrastrutturale molto
dettagliato, che ha consentito loro di precisarne la sede in corrispondenza
delle vescicole sinaptiche.
I
topi privi di otoferlina sono sordi e, in seguito a stimolazione
acustica, non presentano le normali risposte dei neuroni del tronco encefalico
(potenziali evocati), sebbene abbiano una struttura sinaptica normale.
Dunque, i ricercatori hanno ipotizzato che il ruolo della proteina fosse da
ricercarsi in processi legati alla dinamica delle vescicole sinaptiche.
Le
prime indagini hanno mostrato che il numero di vescicole sinaptiche presenti
nei terminali delle IHC dei topi con deficit di otoferlina, era simile a
quello dei topi di controllo e che la localizzazione presso i siti della
membrana presinaptica risultava del tutto normale.
Quando
i ricercatori hanno valutato la presenza della normale esocitosi conseguente
all’ingresso di calcio nelle IHC dei topi con deficit di otoferlina, hanno
rilevato una grossa anomalia, ossia la quasi completa assenza di questa
risposta.
Il
ruolo dell’otoferlina, dunque, sembra consistere nel controllo dell’ultimo
stadio del processo di esocitosi delle vescicole contenenti il
neurotrasmettitore. Roux e collaboratori hanno allora cercato di definire con
maggiore precisione il meccanismo dell’azione della molecola da loro studiata.
Poiché la sequenza aminoacidica del polipeptide corrisponde a quella di una
proteina di membrana legante il calcio, hanno valutato questa possibilità,
trovandone poi conferma: l’otoferlina lega il Ca2+ necessario
per l’esocitosi.
Gli
esperimenti di legame in vitro e l’immunoprecipitazione hanno
rivelato che l’otoferlina interagisce con i componenti dell’apparato di
secrezione sinaptica mediante una modalità calcio-dipendente.
E’
stato riportato che l’esocitosi indotta da depolarizzazione è linearmente
dipendente dall’entità del flusso in entrata del Ca2+ presinaptico,
cosa che, nel caso delle cellule IHC, vuol dire diretto rapporto fra
intensità del suono ed esocitosi.
Christine
Petit e colleghi propongono che la capacità dell’otoferlina di legare il
Ca2+, e la dipendenza dal legame col calcio per l’interazione con
l’apparato secretorio, consentono a questa proteina di agire da trigger del
Ca2+, inducendo una rapida e precisa esocitosi in risposta alle
vibrazioni sonore che depolarizzano le IHC. Infine, suggeriscono che
l’otoferlina sostituisca le sinaptotagmine I e II che non sono state
trovate nelle ribbon synapses delle cellule IHC.
Figu
1. illustrazioni schematiche di una cellula ciliata interna (IHC, a forma di
pallone) e una cellula ciliata esterna (OHC, cilindrico) che mostra posizioni
nella membrana basolaterale prodotti genici funzionalmente importanti. Le
cellule ciliate interne sono veri recettori sensoriali che segnalano la
ricezione del suono al cervello attraverso sinapsi afferenti al nervo uditivo.
E ‘quindi forse non è sorprendente trovare difetti dell’udito associati con le
molecole che possono influenzare la funzione di rilascio del trasmettitore
sinaptico di queste cellule: dei canali del calcio di tipo L voltage-gated per
consentire flusso di calcio, la pompa del calcio Atp2b2 e l’otoferlin. Le cellule
ciliate esterne hanno una funzione motoria localizzata all’interno della coclea
con cui si pensa che Prestin e possibilmente Glut5 siano associati. Il canale
del potassio KCNQ 4 è probabilmente coinvolto nel riciclaggio del potassio.
Il pattern di espressione diversa di questi geni nelle cellule ciliate interne
rispetto alle cellule ciliate esterne enfatizza le diverse funzioni nelle
risposte cocleari.
Quale
sono i cambiamenti nel gene OTOF ?
Sordità sindromica – causata da mutazioni nel
gene OTOF
sono stati identificati Almeno 16
mutazioni nel gene OTOF nei pazienti con una forma di
sordità non sindromica (perdita di udito senza segni e sintomi correlati che
interessano altre parti del corpo) ha chiamato DFNB9. Le persone con queste
mutazioni hanno un tipo di perdita uditiva chiamata neuropatia, che si verifica
quando il suono non viene trasmesso correttamente dall’orecchio interno al
cervello dell’udito.
Alcune mutazioni nel gene OTOF
determinano una produzione di otoferlin anormalmente ridotta, versione non
funzionali di otoferlin o impediscono alle cellule la produzione di una
qualsiasi di questa proteine. Altre mutazioni genetiche probabilmente alterano
la struttura 3-dimensionale dell’ otoferlin, che compromette la sua capacità di
legarsi al calcio.
Una particolare mutazione OTOF è
una causa comune della sordità non sindromica nella popolazione
spagnola. Questa mutazione sostituisce un blocco di costruzione
amminoacido, la glutammina, con un segnale che interrompe la produzione di
proteine prematuramente alla posizione 829
nella proteina otoferlin (scritto come Gln829Ter o Q829X). La mutazione Q829X provoca una versione anormalmente
corto di otoferlin , che interrompe la funzione della proteina e porta alla
perdita dell’udito.
Dove
si trova il gene OTOF?
Citogenetica Località: 2p23.1
Posizione molecolare sul cromosoma
2: coppie di basi 26.457.203 a 26,558,698
(Homo sapiens
Annotazione di uscita 107, GRCh38.p2) (NCBI 
)
Il gene OTOF si
trova sul breve (p) braccio del cromosoma 2 alla posizione 23.1.
Più precisamente, il gene OTOF si
trova dalla coppia di basi 26.457.203 di paia di basi 26.558.698 sul cromosoma
2.
The Journal of
Neuroscience, 26 Agosto 2009 • 29 (34):
10474 -10 487 Otoferlin è fondamentale per un esocitosi cellulare
calcio-dipendente altamente sensibile e lineare a vestibolare capelli del
nastro Sinapsi Didier Dulon, Saaid Safieddine, Sherri Jones, e
Christine Petit Université Victor Segalen Bordeaux 2, Bordeaux
Neuroscience Institute, Squadra uditiva Neurofisiologia di Synapse, Inserm
Misto Unità di Ricerca 587 Salute, University Hospital Hôpital Pellegrin, 33076
Bordeaux, Francia. Didier Dulon riassume otoferlin
.. . La otoferlin è una grande proteina di 2000 aminoacidi
appartenenti alla famiglia di ferlines (vedi schema A). E ‘molto vicino a
disferlina: una proteina essenziale nel traffico vescicolare e la membrana
riparazione delle cellule muscolari. Si compone di 6 aree C2 componenti
potenziali siti per l’associazione di calcio e l’interazione con fosfolipidi di
membrana. Questa proteina ha un singolo segmento
transmembrana al C-terminale che costituisce una possibile ottico sulla
membrana plasmatica e / o vescicole neurotrasmettitore. Otoferlin è
riconosciuta come una proteina essenziale per esocitosi * vescicole
neurotrasmettitore cellule ciliate cocleari (udito sytem). . Il ruolo
preciso della proteina sinaptica rimane poco compresa L’ipotesi corrente è
che agirebbe come un sensore di calcio coordinare la fusione delle vescicole
sinaptiche con flusso di calcio dall’attivazione dei canali del calcio (tipo L:
CAV1 0,3). Il possibile ruolo di otoferlin nella trasmissione sinaptica di
altre cellule ciliate sensoriali nell’orecchio interno, quelli della sala non
era ancora stata esplorata fino ad oggi. Il nostro studio pubblicato sul
Journal of Number Neuroscience mostra che otoferlin si esprime nella regione
sinaptica di diversi rilevatori angolari e accelerazione lineare sono cellule
ciliate degli organi vestibolari. fiale, utricolo e saccule Il vestibolare
potenziali evocati sono significativamente influenzati nei topi con il gene
OTOF è inattivato (Otof- /), suggerendo che otoferlin è importante per le
cellule normali capelli neurotrasmissione del vestibolo. Mostriamo infatti
che la rapida esocitosi delle cellule ciliate sinaptici di tipo I e tipo II è
in gran parte ridotta in tès la Otof – / – mice. Lo studio sulle cellule
vestibolari, dove esocitosi non è completamente abolito come le cellule dei
capelli, ci permette di specificare che otoferlin certamente agisce come un
sensore di calcio con alta affinità. Il otoferlin permette linearizzazione
di esocitosi con il calcio di entrare nella stimolazione basso. I nostri
risultati suggeriscono anche che uno o più altri sensori di calcio di minore
affinità (synaptotagmines?) Sono utilizzati anche a livello delle cellule
sensoriali della porta, in particolare nelle cellule di tipo II.
– See more at: http://www.bordeaux-neurocampus.fr/fr/divers/com-archives/didier-dulon-oreille.html#sthash.4kSWDErT.dpuf
17.
Moreli RI. Kim HJ, Hood LJ, Goforth L. Friderici K, Fisher R. et al Mutations
in the connexin 26 gene (GJB2) among Ashkenazi Jews wìth nonsyndromic recessive
deafness N EngI J Med 339:1500-5. 1998
18.
Lerer 1. Sagi M. Ben-Neriah Z. Wang T, Levi H.Abeliovich D. A deletion mutation
in GJB6 cooperating with a GJB2 mutation in trans in
non-syndromicdeafness:Anovel founder mutation inAshkenazi iews Hum Mutat
18:460.2001
19.
Stojkovic T. L.atour P. Vandenberghe A. Hurtevent JF. Vermersch P Sensorineural
deafness in X-Iinked Charcot-Marie-Tooth disease with connexin 32 mutation
(R142Q). Neurology 52:1010-4. 1999.
20.
Paznekas WA. Boyadjiev SA. Shapiro RE. Danieis O. Wollnik B. Keegan CE. et al.
Connexin 43 (GJA 1) mutations cause the pieiotropic phenotype of
oculodentodigital dysplasia Am J Hum Genet
72408-18.
2003
21.
Louncion N. MarcollaA. Marlin 5. Denoyeile F, Roux i. Feidmann D. et al
Auditory neuropathy or endocochiear hearing bss? OtoiNeurotoi 26.748-54. 2005
Gene
dell’otoferlina, OTOF EMC
Le
mutazioni del gene dell’otoferlina, OTOF, sono responsabili della forma di
sordità recessiva DFNB9. [64] L’otoferlina sarebbe implicata nel traffico
vescicolare presinaptico delle cellule ciliate interne. [65] La sordità è grave
o profonda, prelinguale, e una mutazione di questo gene, Q829X, sembra
particolarmente frequente in Spagna. [66]
La
particolarità di questa forma di sordità è che essa può presentarsi come una
neuropatia auditiva, con otoemissioni acustiche inizialmente conservate. Starr
[67] ha per primo utilizzato il termine di neuropatia uditiva per designare
nell’adulto delle sordità, spesso bilaterali, associate da assenza dell’ABR ,contrastante
con la presenza di otoemissioni acustiche (OEA) normali e grave deficit delle abilità
percettive verbali . Queste forme sono oggi meglio conosciute nell’adulto e nel
bambino e giustificano la valutazione delle otoemissioni per individualizzarle
nel corso della gestione di una sordità di percezione.
La
frequenza di queste sordità è molto elevata (1%) nei neonati ricoverati in
terapia intensiva, il che giustifica uno screening delle sordità con i
potenziali evocati piuttosto che con OEA in questa popolazione. Le mutazioni
dell’otoferlina sono probabilmente rare tra i bambini con una diagnosi di
«neuropatia auditiva»: Madden, [68] tra 22 casi pediatrici, descriveva 15 casi
(68%) con patologie neonatali intricate (iperbilirubinemia: 11/15, prematurità:
10/15, farmaci ototossici: 9/15, ventilazione assistita: 8/15) e e sei casi
erano rappresentati da coppie di due fratelli sordi che evocavano una causa
genetica autosomica recessiva, non essendo stato ricercato il gene della DFNB9,
OTOF .
Il
termine neuropatia uditiva sembra assolutamente inappropriato per la sordità
dovuta al gene OTOF, sordità di origine cocleare per la quale i risultati di
impianto cocleare sembrano del tutto paragonabili ai risultati abituali
dell’impianto. [69]
Lo
studio morfologico dell’orecchio interno e del nervo uditivo con RM nei
pazienti che presentano un quadro clinico di neuropatia ha evidenziato nel 18%
dei casi la presenza di un’anomalia anche anatomica del nervo acustico che
appare ipoplasico, inono- o bilateralmente2’. E’ fondamentale chiarire la presenza
di una riduzione del calibro del nervo o addirittura la sua assenza prima di
procedere a intervento di impianto cocleare che nel primo caso ha opportunità
di successo mentre nel secondo caso è controindicato,
[65]
Petit C., Levilliers J., Marlin S.,
Hardelin J.P. Hereditary hearing loss Metabolic and molecular basis of
inherited disease New York: McGraw-Hill Publishers (2001). 6281-6328
[66]
Migliosi
V., Modamio-Hoybjor S., Moreno-Pelayo M.A., Rodrigues-Ballesteros M., Villamar
M., Telleria D., e al. Q829X,
a novel mutation in the gene encoding otoferlin (OTOF), is frequently found in
Spanish patients with prelingual non-syndromic hearing loss J. Med. Genet. 2002
; 39 : 502-506 [cross-ref]
[67]
Starr A., Picton T.W., Sihinger Y.,
Hood L.J., Berlin C.I. Auditory neuropathy Brain 1996 ; 119 : 741-753
[cross-ref]
[68]
Madden C., Rutter M., Hilbert L.,
Greinwald J.H., Choo D.I. Clinical and audiological features in auditory
neuropathy Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. 2002 ; 128 : 1026-1030
[69]
Loundon N., Marcolla A., Marlin S.,
Denoyelle F., Roux I., Feldmann D., e al. Auditory neuropathy or endocochlear
hearing loss? Otol
Neurotol 2005 ; (in press).
APPROFONDIMENTO
-
- Articolo
- 2010 // JCB vol. 191 n. 1 187-197
Otoferlin
è un sensore di calcio che regola direttamente SNARE mediata fusione della
membrana
1.
Colin P.
Johnson 1, 2 e
2.
Edwin R.
Chapman 1, 2
+
Corrispondenza di Edwin R. Chapman: chapman
@ physiology.wisc.edu
Astratto
Otoferlin
è una grande proteina dominio multi-C2 proposto di agire come un sensore di
calcio che regola sinaptica vescicole esocitosi in cellule ciliate cocleari. Anche
se mutazioni in otoferlin sono stati associati con la sordità, il suo
contributo alla liberazione di neurotrasmettitori è irrisolto. Utilizzando
proteine ricombinanti, dimostriamo che cinque dei sei C2 domini
otoferlin calcio senso con costanti di dissociazione apparente che andavano
13-25 micron; in presenza di membrane, queste affinità apparenti aumentano
fino a sette volte. Utilizzando un saggio fusione delle membrane
ricostituito, abbiamo scoperto che cinque dei sei C2 dominii otoferlin
stimolare fusione delle membrane in modo calcio-dipendente. Dimostriamo anche
che il legame con deficit di un calcio sotto forma di dominio C2C è in grado di
stimolare la fusione delle membrane, sottolineando ulteriormente l’importanza
del calcio per la funzione della proteina. Questi risultati dimostrano per
la prima volta che otoferlin è un sensore di calcio in grado di regolare
direttamente reazioni solubili N-etil maleimmide sensibili
proteina di fusione della proteina attaccamento recettoriali di membrana
fusione.
Introduzione
La coclea
è un tubo a spirale piene di liquido trovato all’interno dell’orecchio interno,
dove svolge un ruolo centrale nella audizione dei mammiferi. In risposta
al suono, fasci capelli situati su cellule ciliate all’interno della coclea
sono deviati, causando l’apertura dei canali ionici meccanosensibili che
alterano la tensione della membrana cellulare. Questo cambiamento di
potenziale di membrana determina l’attivazione dei canali del calcio di tipo L
voltage-gated per consentire flusso di calcio, che innesca sinaptiche esocitosi
delle vescicole e rilascio dei neurotrasmettitori (Glowatzki
e Fuchs, 2002). Questa catena di eventi deve avvenire rapidamente
distinguere temporalmente tra suoni (Rose et
al., 1967).Sinapsi formate dalle cellule ciliate interne (IHCS) contengono
anche le strutture specializzate chiamate nastri sinaptiche che sono in grado
di legare numerose vescicole sinaptiche in siti di rilascio per facilitare alti
tassi di trasmissione sinaptica sostenuta(Liberman,
1980; Glowatzki
e Fuchs, 2002).
Il passo
fusione delle vescicole si crede di essere mediato dalle proteine
SNARE synapbtobrevin 2, sintaxina 1A, e SNAP-25 sulle vescicole e
membrane plasmatiche(Safieddine
e Wenthold, 1999). Tuttavia, SNAREs non sono sensibili al calcio, e in saggi
di fusione ricostituiti, mediano fusione su scale temporali che sono ordini di
grandezza più lento rispetto osservata in vivo (Weber et
al., 1998). Nei neuroni, la sensibilità di calcio e cinetiche veloci
sono in genere conferiti da proteine SNARE vincolanti, tra cui
synaptotagmin I / II (Chapman,
2008). Tuttavia, le cellule dei capelli mature hanno poco o
nessun synaptotagmin I / II (Safieddine
e Wenthold 1999), ed è stato proposto che la proteina transmembrana
otoferlin potrebbe servire come il sensore di calcio che regola il rilascio di
neurotrasmettitori cella capelli accelerando SNARE-mediata fusione della
membrana (Roux et
al., 2006).
Otoferlin
verifica in molteplici varianti di splicing, compresa una forma acida
1.997-amino, consiste di un segmento transmembrana e citoplasmatici sei domini
C2, e un breve tre C2 isoforma dominio trovato negli esseri umani, ma non
topi (Yasunaga
et al., 2000). Un ruolo per otoferlin nel rilascio di neurotrasmettitore
IHC si basa su diverse linee di prove, tra cui la constatazione che i topi
privi otoferlin sono profondamente sordi, ma hanno processi di trasduzione
mechanoelectrical intatti e funzionali (Roux et
al., 2006). Questi topi hanno anche neuroni afferenti funzionali,
suggerendo che il ruolo di otoferlin nel percorso uditivo si trova all’interno
della cellula pelo tra le trasduzione e afferenti attivazione dei neuroni passi
mechanoelectrical. A sostegno di questa idea, le cellule ciliate nei topi
knockout otoferlin non rilasciano neurotrasmettitori in risposta alla
depolarizzazione della membrana e afflusso di calcio, pur avendo apparentemente
normale morfologia delle sinapsi (Roux et
al., 2006). Inoltre,> 16 differenti mutazioni nonsense e missense
nel gene codificante umano otoferlin sono stati collegati a un tipo di perdita
di udito non sindromica conosciuta come DFNB9. Tuttavia, gli studi di
localizzazione subcellulare hanno portato a conclusioni contrastanti. Uno
studio immunogold colorazione riferisce localizzazione di vescicole
sinaptiche (Roux et
al., 2006,mentre immunofluorescenza indicato che otoferlin è localizzato
prevalentemente Golgi ed eventualmente in endosomi precoci) (Schug et
al., 2006; Heidrych et al., 2008). Così, otoferlin
può avere funzioni alternative o aggiuntive, come il riciclo delle vescicole o
il traffico di membrana nelle Golgi. Recentemente, è stato riferito che
mutazioni puntiformi all’interno otoferlin provocato membrana plasmatica
ripiegamento (Heidrych
et al., 2008).Ciò suggerisce un ruolo per otoferlin nella endocitosi e
vescicole riciclaggio e potrebbe spiegare il motivo otoferlin IHC difetti ko
esporre in esocitosi.
Da studi
basati sulle cellule, non è del tutto chiaro se otoferlin contribuisce
direttamente alla esocitosi o è coinvolta in eventi secondari e / oa valle di
vescicole sinaptiche fusione.Tuttavia, va notato che questi processi cellulari pongono
diverse esigenze funzionali sulla proteina, e si può quindi ottenere
informazioni sul ruolo di otoferlin in cellule ciliate attraverso studi
funzionali in vitro. In particolare, se otoferlin è infatti un sensore di
calcio coinvolte nel rilascio di neurotrasmettitore, ci aspetteremmo forme
ricombinanti della proteina di legare calcio, SNAREs, e membrane e di
accelerare SNARE mediata fusione delle membrane in modo calcio-dipendente. In
questo studio, abbiamo proiettato l’individuo otoferlin domini C2 per queste
proprietà per determinare se otoferlin opera come un sensore di calcio. Inoltre,
una grande tre C2 costrutto dominio, C2DEF, è stato creato per verificare le
proprietà del segnalato piccolo tre C2 variante di splicing del dominio. Un
costrutto C2ABC è stato analizzato in parallelo per determinare quali sono i
domini aggiuntivi tre C2 N-terminali, che si trova nella isoforma più grande,
contribuiscono alla funzione della molecola.
Risultati
Otoferlin è un sensore di calcio
È stato
suggerito che otoferlin potrebbe funzionare come un sensore di calcio in
cellule ciliate interne cocleari, le cellule ciliate esterne, e le cellule
vestibolari, analogo al ruolo che synaptotagmin I / gioco II durante il
rilascio dei neurotrasmettitori SNARE-mediata nei neuroni (Roux et
al., 2006) . Entrambi i domini C2 di synaptotagmin mi legano
ioni calcio attraverso il coordinamento con residui di aspartato situati su una
estremità di ogni dominio C2 (Shao et
al., 1998;. Fernandez
et al, 2001). L’allineamento della sequenza primaria dei domini C2
otoferlin con residui aspartato leganti il calcio di synaptotagmin I rivela una
mancanza di conservazione tra i primi tre domini C2 N-terminale della proteina(Fig. 1, A
e B). Tuttavia, i domini C2 da diverse altre proteine
non possiedono tutti cinque residui aspartato ancora, in alcuni
casi, sono ancora in grado di legare il calcio (Therrien
et al., 2009). Pertanto, non è chiaro dal controllo della sequenza da cui
dominii otoferlin eventuali legare il calcio. Per rispondere a questa
domanda, abbiamo esaminato la fluorescenza intrinseca dei costrutti otoferlin
ricombinanti in funzione della concentrazione di calcio. In molti casi,
gli spettri di fluorescenza di amminoacidi aromatici all’interno di domini C2
hanno dimostrato di essere sensibile al legame del calcio (Nalefski
et al., 2001).
Visualizza versione più
grande:
Figura 1.
Schema di full-length otoferlin ei frammenti otoferlin
utilizzati in questo studio. (A) Otoferlin è composta da
sei domini tandem C2 seguite da un dominio transmembrana C-terminale (TMD). Proteine
ricombinanti composti da entrambi i domini C2 isolati o tre frammenti
C2 dominio sono stati generati in base alle designazioni aminoacidi elencati a
destra. (B) Conservazione di leganti leganti il calcio
putativi dei domini C2 di otoferlin (oto).Synaptotagmin I (SYT) C2A e C2B sono
elencati per il confronto. I numeri corrispondono all’ordine dei cinque
residui di aspartato che funzionano come ligandi nella C2A (D172, 178, 230,
232, e 238) e domini C2B (D303, 309, 363, 365, 371) di synaptotagmin I (Sutton et
al., 1995;. Shao
et al, 1998; Fernandez
et al., 2001).
Come una
schermata iniziale per legare il calcio, gli spettri di fluorescenza di
costrutti ricombinanti otoferlin sono stati misurati in presenza sia di 0,1 mM
EGTA o 1 mM di calcio. Come mostrato in Fig. 2, aggiunta
di calcio portato a significativi aumenti l’intensità di fluorescenza di
isolato C2B, C2C, C2D, C2E, e C2F, ma non C2A. Inoltre, i frammenti
ricombinanti C2ABC e C2DEF esposti anche aumenti significativi della
fluorescenza in risposta al calcio. Per diversi frammenti otoferlin, abbiamo
anche rilevato uno spostamento della lunghezza d’onda di emissione massimi
(λ max). Questi
cambiamenti sono stati più di primo piano nelle grandi tre frammenti C2
dominio, con il frammento N-terminale C2ABC visualizzazione di un cambiamento
notevole blu e la C2DEF un leggero spostamento verso il rosso. Titolazioni
calcio successivi portarono curve dose-risposta per sigmoidali entrambi i
costrutti più grandi ei domini C2 isolate (Fig. 3, A
e B). Da queste trame, [Ca 2+] 1/2 valori
sono stati determinati (Tabella
I). Per verificare la specificità del legame di calcio, gli esperimenti
di titolazione sono stati ripetuti in presenza di magnesio 0,75 mM. Magnesio
non ha avuto effetto sui calcio di dose-risposta, indicando che il legame è
specifico per il calcio (dati non pubblicati).
Visualizza questa tabella:
Tabella I.
[Ca 2+] 1/2 valori
per ciascun dominio C2 di otoferlin
Visualizza versione più
grande:
Figura 2.
Normalizzato spettri di emissione di fluorescenza di nativi
catene laterali aromatiche otoferlin in presenza di 0,1 mM EGTA o calcio 1 mM. 1 pM
purificate otoferlin frammenti erano eccitati a 280 nm e gli spettri di
emissione raccolti da 290 al 380 nm. Sono mostrati spettri rappresentante
per ogni dominio in condizioni EGTA o di calcio.Le tracce sono dati
rappresentativi dei quattro studi clinici indipendenti. FI, intensità di
fluorescenza.
Visualizza versione più
grande:
Figura 3.
Cambiamenti calcio-dipendenti in fluorescenza otoferlin. (A e
B) Trame normalizzati delle intensità di emissione di 1 micron dei tre-C2
frammenti dominio C2ABC e C2DEF (A) e 1 micron di isolato domini C2 C2B, C2C,
C2D, C2E e C2F (B) in funzione di aumentare concentrazione di calcio in assenza
di liposomi. (C e D) titolazioni calcio di C2ABC, C2DEF (C), e ciascun
dominio C2 isolato di otoferlin (D) in presenza di liposomi composti da 15% PS,
55% PC e 30% PE. Le barre di errore indicano media ± DS (n = 4).
Molti
domini C2 legano alle membrane, con diverse affinità e lipidi headgroup
specificità, come parte integrante della loro funzione (Nalefski
et al., 2001). Binding è spesso dipendente dal calcio, con il catione,
proteine, lipidi e formando un complesso con un’affinità proteina calcio-binding
migliorata. Per sondare i potenziali cambiamenti di affinità calcio
indotti da membrane, curve di titolazione di calcio sono stati generati in
presenza di liposomi composti da 15%, 30% DOPS PAPA, e il 55% POPC.Analogamente
ai campioni senza liposomi, tutti i costrutti otoferlin tranne C2A visualizzato
aumenti fluorescenza in presenza di calcio rispetto alle misurazioni effettuate
in EGTA. I risultanti curve di titolazione di calcio (Fig. 3, C
e D) per i campioni otoferlin-liposomi mostrano uno spostamento
verso sinistra in [Ca 2 +] 1/2, con valori ≤10 micron per tutti i costrutti
testati (Tabella
I). Concludiamo che otoferlin lega calcio via almeno cinque
dei suoi sei domini e che le membrane aumentare il legante il calcio affinità
apparente di questi domini.
I domini C2 delle proteine SNARE legano otoferlin
Come
descritto nell’introduzione, è stato riportato che associa otoferlin con le
proteine t-SNARE sintaxina 1 e SNAP-25. Tuttavia, sono stati
esaminati né i domini specifici di otoferlin che legano t-SNARE né gli effetti
del calcio sulla rilegatura. Per affrontare questi problemi, un test di
immunoprecipitazione è stata effettuata utilizzando il ricombinante t-SNARE
eterodimero syntaxin1A / SNAP-25B e un anticorpo anti-sintaxina (Fig. 4, A
e B).20 mM di ciascun otoferlin dominio C2 è stato testato per
coimmunoprecipitation in presenza di 0,1 mM EGTA o 1 mM di calcio. Anche
se tutti i sei domini immunoprecipitati con l’eterodimero t-SNARE, quattro dei
domini isolati, C2C, C2D, C2E, e C2F, visualizzati attività di legame
calcio-promossa (Fig. 4, A
e B). Il legame di altri due domini, C2A e C2B, non è stata
arricchita da calcio. Questi risultati sono coerenti con uno studio a
discesa GST precedente, che ha concluso che C2A legato in maniera
calcio-indipendente sintaxina, mentre l’attività-SNARE vincolante C2F era
regolata dal calcio (Ramakrishnan
et al., 2009).
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Figura 4.
Coimmunoprecipitation di eterodimeri t-SNARE con i domini C2
isolati di otoferlin.(A) I saggi sono stati eseguiti utilizzando 20 mM di ciascun
dominio C2 usando un anticorpo monoclonale anti-sintaxina. T indica il
dominio C2 totale caricato nel campione, e Ca ed E indicano la presenza di 1 mM
di calcio o 0,1 mM EGTA, rispettivamente. H-chain denota la catena pesante
dell’anticorpo anti-sintaxina (HPC-1). (B) La quantificazione dei dati
coimmunoprecipitation tramite densitometria. (C) gel Rappresentante in cui
ciascun dominio C2 isolato è stato analizzato per la sua capacità di cofloat
con vescicole in un gradiente Accudenz in presenza di 0,1 mM EGTA o 1 mM di
calcio libero. È mostrato (D) calcio-triggered C2 dominio indotta da
liposomi aggregazione come misurato da OD 400. Torbidità
di campioni contenenti liposomi è stata monitorata in entrambi 1 mM di calcio
libero o 0.1 mM EGTA. Le barre di errore indicano media ± DS (n = 3).
Abbiamo
anche sondato per le interazioni tra otoferlin nativo e SNARE complessi
ternari.Saggi coimmunoprecipitation usano interi estratti detergenti cervello e
GST esperimenti di pull-down con sinaptobrevina ricombinante 2 ha rivelato che
otoferlin lega sintaxina ternario 1 / SNAP-25 / sinaptobrevina 2 complessi ma
non interagisce direttamente con sinaptobrevina (Fig. S1,
A e B), che è analogo a synaptotagmin 1 (Earles et
al., 2001).
I domini di C2 legano otoferlin a membrane lipidiche
La
capacità di legare otoferlin membrane non è stato affrontato. Poiché
synaptotagmin I agisce almeno in parte legandosi a membrane, abbiamo testato
ogni otoferlin dominio C2 per l’attività di legame membrana in presenza di EGTA
o calcio usando un test liposoma coflotation. In questo saggio, 15%, 55%
DOPS POPC, e 30% liposomi PAPA in una soluzione contenente il dominio C2 di
interesse sono lanciata attraverso un gradiente di densità, portando con sé
qualsiasi proteina legata. SDS-PAGE è eseguita sul campione raccolto per
saggiare per proteine legate ai liposomi. A differenza delle
suddette misure di fluorescenza, questo test misura direttamente il legame
delle proteine di liposomi anziché lo spostamento affinità calcio. Sebbene
tutti i sei C2 domini legati a liposomi in presenza di 1 mM di calcio
libero (Fig. 4
C), i domini C2A, C2B, e C2C pure tenuti in una certa misura
in condizioni prive di calcio. Notiamo anche che i più grandi di tre
frammenti C2 dominio dei otoferlin direttamente associati a liposomi in EGTA, e
il legame è stato migliorato con l’aggiunta di calcio (Fig. S1 C).
Otoferlin aggrega liposomi in maniera calcio-dipendente
Uno studio
precedente di synaptotagmin dimostrato la sua capacità di membrane di aggregati
in maniera dipendente dal calcio (Popoli e
Paternò 1992), e questa attività è stata proposta per facilitare la
fusione delle membrane. Dato il ruolo ipotizzato di otoferlin in
esocitosi, abbiamo cercato di determinare se otoferlin can membrane anche
aggregati.Aggregazione membrana è stata determinata monitorando i cambiamenti
nella OD 400 di liposomi nel tempo (Fig. 4
D). Sebbene l’aggiunta di forme di dominio isolati o multi-C2
di otoferlin ad un campione liposomi in EGTA non ha comportato un aumento
sensibile del OD 400 del campione nel corso di 5 min, aggiunta di 1 mM di
calcio libero ha comportato una significativa aumento del OD 400 per cinque
dei sei domini C2 isolate provati e per le grandi frammenti dominio tre
C2 (Fig. 4
D). Questa maggiore valore di OD 400 è
rimasto stabile nel periodo di monitoraggio (~15 min) ed è stato invertito per
aggiunta di un eccesso di EGTA. Tra i domini C2 testati, solo C2A è
riuscito a indurre cambiamenti significativi nel OD 400. L’aggiunta
di calcio per soluzioni di liposomi privi di proteine non ha
comportato un livello significativo di aggregazione.
Calcio / otoferlin accelera SNARE mediata fusione della membrana
L’utilizzo
di un sistema di ricostituita in vitro, gli effetti in vivo di synaptotagmin su
SNARE mediata fusione della membrana sono state ricapitolato (Tucker et
al., 2004; Bhalla et al., 2006; Stein et
al., 2007; Chicka et al, 2008. ; Gaffaney et al., 2008;. Xue
et al, 2008). In questo sistema, proteoliposomi v-SNARE contenenti legate
alla membrana NBD e di trasferimento di energia di risonanza di fluorescenza
rodamina coppie sono mescolati con t-SNARE proteoliposomi che non contengono
fluorofori. Fusione tra V- e t-SNARE proteoliposomi risultati in lipidi
miscelazione dei due proteoliposomi e diluizione della coppia trasferimento di
energia di risonanza di fluorescenza. Questa diluizione aumenta la
distanza tra il donatore e accettore, conseguente dequenching del NBD. Utilizzando
questo sistema, ci siamo chiesti se otoferlin può accelerare SNARE mediata
fusione della membrana e se il calcio modula di otoferlin funzione putativa
durante la fusione.
In primo
luogo abbiamo proiettato i tre-C2 costrutti dominio (C2ABC e C2DEF) per la loro
capacità di regolare fusione tra v-SNARE e proteoliposomi t-SNARE (Fig. 5, A
e B). I frammenti otoferlin sono stati incubati con un rapporto
1: 2 dei V- e t-SNARE proteoliposomi per 20 min a 37 ° C in 0,1 mM EGTA seguito
dall’iniezione di calcio per una concentrazione finale di 1 mM (Fig. 5, A
e B, frecce). Dopo aggiunta di calcio, entrambi i
frammenti di otoferlin indotto un marcato aumento della velocità e l’entità
finale della fusione, come indicato dalla dequenching di NBD fluorescenza. In
assenza di calcio, né frammento otoferlin maggiore fusione SNARE-mediata in
modo apprezzabile. In assenza di otoferlin, è stato osservato solo un
lento aumento lineare SNARE-dipendente in fusione, che è coerente con un
precedente studio di ricostituito SNARE mediata fusione della membrana (Chicka et
al., 2008). Come controllo finale, e di distinguere tra la fusione
completa e hemi, abbiamo bonificato la fluorescenza del foglietto esterno con
ditionito e vigilato destino del foglietto interno durante reazioni di fusione
ricostituiti. Dopo il trattamento ditionito, è stata osservata dequenching
del foglietto interno, dimostrando che completa fusione avvenuta per tutti i costrutti
otoferlin riportati in questo studio (dati non pubblicati).
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Figura 5.
Otoferlin stimola SNARE mediata fusione proteoliposome in
maniera calcio-dipendente. Esperimenti di fusione sono stati
effettuati utilizzando donatori proteoliposomi v-SNARE e t-SNARE proteoliposomi
accettore con concentrazioni variabili di frammenti otoferlin ricombinanti. I
componenti sono stati incubati per 20 min a 37 ° C in presenza di 0,1 mM EGTA. A
t = 20 min, il calcio è stato aggiunto ad una concentrazione finale di 1 mM. (A
e B) Sia C2ABC (A) e C2DEF (B) stimolati SNARE mediata fusione proteoliposome
in risposta al calcio. (A e B) E indica che l’esperimento è stato condotto
in condizioni EGTA. (C e D) Valore medio per l’entità della fusione
espressa come percentuale della massima intensità di fluorescenza dopo
l’aggiunta di detergente per 10 pM C2ABC (C) e C2DEF (D) nelle condizioni
indicate. Fusion è stata attenuata con l’aggiunta di cd-SYB o cd-t-SNARE. Barre
di errore rappresentano SD (n = 3).
Titolazione
dei frammenti otoferlin ha portato ad un aumento della velocità e il grado di
fusione fino a saturazione è stato raggiunto (Fig. 5, A
e B), e calcio esperimenti dose-risposta rivelato [Ca 2+] 1/2 valori
di 109 pM e 131 micron per C2ABC e C2DEF, rispettivamente (Fig. S2). Per
garantire che la fusione proceduto attraverso un percorso SNARE-dipendente,
saggi sono stati condotti anche in presenza sia del dominio citoplasmatico
solubile synaptobrevin (cd-SYB) o una forma solubile del eterodimero t-SNARE
(dominio citoplasmatico del t-SNARE eterodimero [cd-t-SNARE]), che impedirà il
corretto trans-SNARE accoppiamento del V- e proteoliposomi t-SNARE. Entrambi
cd-SYB e cd-t-SNARE ridotto il grado finale di fusione (Fig. 5, C
e D), indicando che otoferlin-accelerato procede fusione
attraverso un percorso SNARE-dipendente e che otoferlin sola non può indurre
liposomi fusione. Notiamo anche che otoferlin non poteva promuovere la
fusione delle membrane dei liposomi che difettavano le proteine
V- o t-SNARE (Fig. 5
D).Insieme, questi dati dimostrano per la prima volta che sia la
metà N- e C-terminali di otoferlin possono stimolare SNARE mediata fusione
delle membrane in modo calcio-promosso.
Abbiamo
poi testato se otoferlin può fare “lavoro” sulle proteine
SNARE. Un precedente studio ha dimostrato che sintaxina 1 e
SNAP-25 deve essere preassemblato prima della ricostituzione di mediare fusione
con proteoliposomi v-SNARE (Bhalla et
al., 2006).Tuttavia, il calcio e synaptotagmin posso guidare pieghevole di
SNAP-25 solubile sul sintaxina ricostituito, con conseguente attività di
fusione (Bhalla et
al., 2006). Abbiamo ripetuto questi esperimenti e, come mostrato
in Fig. 6, apprezzabile
la fusione delle membrane non è stata osservata quando sintaxina è stato
ricostituito ma SNAP-25 è stata aggiunta in forma solubile. Tuttavia, in
presenza di due metà di otoferlin, C2ABC o C2DEF, fusione è stato osservato
dopo aggiunta di calcio; in assenza di calcio, la fusione non è stata
osservata in qualsiasi condizione (Fig. 6). Questi
risultati forniscono la prova funzionale che il calcio / otoferlin regola la
piegatura e l’attività delle proteine SNARE.
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Figura 6.
Calcio / otoferlin consente t-SNARE, che non sono stati
preassemblati in eterodimeri, a guidare la fusione delle membrane. (A)
saggi di Fusion sono stati condotti utilizzando sintaxina ricostituito 1 e
sinaptobrevina 2 vescicole in presenza di 15 micron solubile SNAP-25 e 4 micron
otoferlin . (B) In entrambi i casi la metà di otoferlin, C2ABC o C2DEF era
sufficiente per accelerare la fusione della membrana utilizzando solubile
SNAP-25. In assenza di calcio o otoferlin, la fusione non è stata
osservata. E indica che l’esperimento è stato eseguito in condizioni EGTA.
Come un
sondaggio finale di proprietà funzionali di otoferlin, abbiamo condotto test
membrana fusione con domini C2 isolate per determinare quali sono stati
responsabili per l’effetto stimolante osservato osservato nei frammenti più
grandi (Fig. 7 e Fig. S3). Le
concentrazioni di dominio C2 che vanno da 0 a 30 micron è stata titolata nel
test di fusione, come dettagliato per le citate frammenti dominio tre C2. Dopo
l’aggiunta di calcio at = 20 min, la fusione delle membrane è stata osservata
per reazioni che contenevano C2B, C2C, C2D, C2E e C2F per fornire una misura
finale di fusione di ~ 20% alle concentrazioni massime testate. È
interessante notare, esame della forma delle curve di fusione rivela differenze
nella cinetica di fusione, con C2E mostrando più lento rispetto alla cinetica
domini isolati C2B, C2C, C2D, e C2F (Fig. 7). Come
mostrato in Fig. 7, l’uso
di liposomi senza SNARE portato alla totale assenza di fusione per tutte e
cinque domini C2, dimostrando ancora il requisito SNARE (Fig. 7). Fino
a 30 pM, C2A omesso per accelerare fusione SNARE mediata indipendentemente
dalla presenza di calcio (Fig. 7).
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Figura 7.
I domini C2 isolati di otoferlin stimolano la fusione delle
membrane. Titolazioni di ogni dominio C2 isolato, 0-30 micron,
dimostrare la capacità della domini otoferlin C2 C2B, C2C, C2D, C2E, e C2F per
stimolare fusione tra V- e t- proteoliposomi rullante. I domini C2 isolate
non sono riusciti a stimolare la membrana fusione tra (PF) liposomi privi di
proteine. E indica che l’esperimento è stato eseguito in condizioni EGTA.
Le mutazioni puntiformi disturbare la funzione dei domini C2 di
otoferlin
Un
isoleucina precedentemente riportato di asparagina mutazione nel dominio C2B di
otoferlin è stato trovato per indurre la grave perdita di udito in modelli
murini (Longo-Indovina
et al., 2007). Sebbene la struttura di questo dominio non è attualmente
noto, allineamento di sequenza con altri domini C2 suggerisce che questa
mutazione si trova all’interno di uno dei filamenti beta del dominio. Un
precedente studio ha suggerito che questa mutazione può interrompere
pieghevole, con conseguente diminuzione della stabilità e ha aumentato i tassi
di turnover all’interno della cellula (Longo-Indovina
et al., 2007). Per studiare le proprietà funzionali di questo mutante,
abbiamo introdotto la mutazione I318N nel dominio C2B isolato. Fluorescenza
spettri di tipo selvaggio (WT) e il dominio mutante differivano
notevolmente (Fig. 8
A), suggerendo una perturbazione della struttura terziaria, e
lo spettro di fluorescenza del mutante I318N era influenzata dal calcio(Fig. 8
A), indicando una perdita di attività calcio-sensing. Come
una seconda prova di funzionalità, il dominio C2B mutante è stato analizzato
per la sua capacità di aggregare membrane; in contrasto con WT, il mutante
non ha membrane aggregati in presenza di 1 mM di calcio (Fig. 8
B). Infine, a 30 mM concentrazioni dominio C2 equivalenti, il
dominio WT C2B accelerato fusione SNARE-mediata in risposta al calcio aggiunto,
mentre il mutante I318N C2B omesso di avere alcun effetto sulla fusione in
presenza di EGTA o 1 calcio mM (Fig. 8
C).
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Figura 8.
Un isoleucina patologico di mutazione asparagina missenso
distrugge la struttura e la funzione del dominio C2B di otoferlin.(A) Gli
spettri di fluorescenza di endogeni residui aromatici del WT isolato (a
sinistra) e I318N (a destra) del dominio C2B mutante differiscono nei loro
profili spettrali. Sebbene una notevole differenza nell’intensità di
fluorescenza (FI) del WT C2B si osserva in 0,1 mM EGTA contro condizioni calcio
1 mM, gli spettri del mutante I318N mostra alcun cambiamento percepibile in
fluorescenza in risposta al calcio. (B) L’attività di aggregazione
membrana C2B è interrotta dalla mutazione I318N. Dopo l’iniezione di
proteine at = -5 min, calcio inserito at = 0 min ad una
concentrazione finale di 1 mM. OD 400 misure
per la WT C2B (a sinistra) e I318N (a destra) rivelano che la mutazione
puntiforme abroga C2B-mediata aggregazione liposomi calcio-triggered. I
valori OD 400 dopo aggiunta di calcio erano 0,11 ± 0,02 per WT e 0,02 ±
0,01 per il mutante C2B (n = 3). (C) Prove fusione
ricostituiti eseguite in presenza di WT o I318N mutante C2B. Dopo
l’aggiunta di 1 mm di calcio gratuito, WT C2B accelerata fusione SNARE-mediata,
mentre il I318N non è riuscito a migliorare il tasso o la portata della
fusione.
Infine,
abbiamo studiato gli effetti di mutanti due dei residui leganti il calcio
putativi nel settore C2C di otoferlin (Fig. S4). Queste
mutazioni dovrebbero abrogare l’attività legante il calcio del dominio C2 e
quindi eliminare la stimolazione calcio-triggered di SNARE mediata fusione
della membrana. Infatti, anche se le misurazioni di dicroismo circolare
indicano che la proteina mutante è stato correttamente ripiegata (dati non
pubblicati), abbiamo trovato che questo mutante non accelera la fusione delle
membrane in presenza o assenza di calcio (Fig. S4).
Discussione
L’obiettivo
di questo studio è stato quello di verificare se otoferlin è infatti un sensore
di calcio in grado di controllare direttamente le reazioni di fusione della
membrana SNARE-mediata. Anche se un precedente studio di cellule ciliate
interne trovato otoferlin essere essenziale per il rilascio delle vescicole
calcio-evocata (Roux et
al., 2006), uno studio recente immunofluorescenza non è riuscito a
rilevare colocalizzazione tra nastri sinaptiche otoferlin e cellulari capelli,
e Schug et al. (2006) suggerivano
ruoli alternativi per la proteina, comprese eventuali contributi al Golgi e il
traffico endosomale. In questo studio, abbiamo condotto misurazioni
dirette utilizzando ridotti negli approcci vitro, tra cui un sistema di fusione
della membrana SNARE mediata ricostituito, per testare di otoferlin proprietà
funzionali. Questi esperimenti sono vantaggiosi in quanto sono privi di
ambiguità che possono sorgere a causa della complessità dei sistemi cellulari e
sono quindi in grado di soddisfare direttamente di otoferlin capacità di agire
come regolatore calcio-attivato della fusione delle membrane.
Otoferlin rileva concentrazioni micromolari di calcio
Monitorando
gli spettri di fluorescenza dei residui aromatici endogeni di otoferlin,
abbiamo determinato che almeno cinque dei sei domini C2 del calcio proteine
bind con Ca 2+] [1/2valori inferiori a quelli riportati per synaptotagmin I (Davis et
al ., 1999; Fernandez
et al.,2001;. Nalefski
et al, 2001). Solo C2A non si osservava alcun cambiamento della
fluorescenza in presenza di calcio. È interessante notare, abbiamo
osservato significative variazioni di calcio indotte massimali di emissione per
alcuni dei domini C2 e entrambi i frammenti di dominio tre C2. Poiché è
stato ben stabilito che gli spettri di emissione di triptofano è altamente
sensibile alla polarità del suo ambiente locale (Vivian e
Callis 2001), abbiamo il sospetto che i cambiamenti sono causati da
variazioni del grado di esposizione del lato aminoacidi aromatici catene a
solvente. Infine, titolazioni calcio in presenza di membrane provocato
spostato a sinistra [Ca2 +] i valori 1/2 rispetto a campioni mancanti
membrane. Pertanto, la presenza di membrane aumenta l’affinità dei domini
C2 otoferlin per calcio. Notiamo che le affinità apparenti, misurate in
presenza di membrane, sono anche maggiori di quelli precedentemente riportati
per synaptotagmin I (Brose et
al.,1992;. Davis
et al, 1999;. Nalefski
et al, 2001).
Tutti i sei domini C2 delle proteine SNARE legano
otoferlin
Utilizzando
una procedura di immunoprecipitazione, abbiamo scoperto che tutti e sei i
domini C2 otoferlin tenuti a syntaxin1A / SNAP-25 eterodimeri. Questa scoperta
segna la prima volta tutti i sei settori sono stati analizzati per
l’attività-SNARE vincolanti e suggerisce che ognuno di questi domini possono
funzionare a modulare l’attività SNARE.È interessante notare che la C2
C-terminale domini C2C, C2D, C2E, e C2F erano più sensibili al calcio in
termini di loro proprietà-SNARE vincolante rispetto alla C2A N-terminale e
domini C2B. Dato che una variante di splicing contenente solo i tre domini
C-terminale è stata riportata, la stechiometria, affinità di legame, e
sensibilità al calcio delle otoferlin può essere sintonizzato via preferenziale
espressione di forme lunghe o corte della proteina.
Il otoferlin domini C2 legano e membrane lipidiche aggregati
Una
caratteristica caratteristica di molti domini C2 riguarda la loro capacità di
legarsi a doppi strati lipidici. Inoltre, è stato dimostrato che
synaptotagmin I agisce almeno in parte penetrando e piegatura membrane (Martens
et al., 2007; Hui et al., 2009). Tuttavia, la questione
se otoferlin può legarsi membrane lipidiche non era stato affrontato in uno
studio precedente. Usando un test coflotation, abbiamo scoperto che tutti
e sei i domini C2 tenuti a liposomi composti da POPC / DOPS / PAPA. Membrana-legame
attività è stata promossa da calcio per i domini C2C, C2D, CD2E, e C2F. C2A
e C2B hanno mostrato una forte componente di calcio-indipendente vincolante. Sorprendentemente,
nonostante la sua capacità di legare membrane in assenza di calcio, calcio C2B
ancora necessaria per indurre l’aggregazione dei liposomi, così come C2C, C2D,
C2E e C2F. Al contrario, il dominio N-terminale C2A omesso di membrane
aggregati in alcuna delle condizioni testate. È interessante notare che,
synaptotagmin posso membrane anche aggregare attraverso i suoi domini C2 (Popoli e
Paternò, 1992; Bhalla et al., 2006;.Gaffaney
et al, 2008). E ‘possibile che tutti i domini C2-fusione accelerazione
membrana operano in parte attraverso un meccanismo di aggregazione membrana.
Otoferlin stimola SNARE mediata fusione delle membrane in
risposta al calcio
Utilizzando
un saggio fusione delle membrane ricostituito, abbiamo scoperto che cinque dei
sei domini C2 accelerare la fusione delle membrane in presenza di calcio, ma
non in condizioni EGTA. Fusion SNARE era dipendente dal fatto che
otoferlin riuscito a indurre lipidi miscelazione in presenza di cd-SYB,
cd-t-SNARE, o quando liposomi privi di proteine sono stati
utilizzati nel saggio di fusione. Questi risultati sono ciò che ci si
aspetterebbe da un sensore di calcio per fusione della membrana e
qualitativamente sono d’accordo con il lavoro precedente focalizzata sul
synaptotagmin I (Tucker et
al., 2004;. Chicka
et al, 2008;Gaffaney
et al., 2008). Tuttavia, otoferlin è distinto da synaptotagmin I in
quanto contiene più domini C2-fusione attiva collegati in serie e possiede
linker più lunghi tra ciascun dominio C2 che possono dotare otoferlin con
flessibilità e raggiungere. Se combinato con i risultati che otoferlin
lega miosina VI e canali del calcio (Heidrych
et al., 2009;.Ramakrishnan
et al, 2009), si è tentati di ipotizzare che i collegamenti di proteine
vescicole di insidie e canali del calcio in uno
stato ancorato e innescato . Data la nostra scoperta che la maggior parte
dei domini C2 di otoferlin possono regolare direttamente la fusione delle
membrane e la recente proposta di vescicole sinaptiche legate a nastri sono in
grado di fusione composto (Matthews
e Sterling, 2008), gli scenari con cui otoferlin potrebbero operare diventare
numerosi.
Mutazioni puntiformi disturbare la funzione di domini C2
otoferlin
Mutazioni
missense patologici nel C2C (Mirghomizadeh
et al., 2002), C2D (Tekin et
al., 2005), e domini C2F (Migliosi
et al., 2002) di otoferlin sono stati collegati a sordità profonda in
diversi pazienti umani. È interessante notare che, in ogni caso, una
singola modifica aminoacido in un singolo dominio C2 risultati in sordità; in
alcuni casi, questo sembra essere causato dalla degradazione della intera
proteina in risposta al misfolding singoli domini. Ad esempio, una
mutazione missenso recentemente riportato nel dominio C2B portato alla perdita
di otoferlin e sordità nei topi (Longo
indovinare et al., 2007).Abbiamo trovato che questa mutazione I318N
dato luogo a fluorescenza intrinseca che è stato alterato rispetto al dominio
WT C2. I massimi di emissione e l’intensità di spettri di fluorescenza
sono altamente sensibili all’ambiente di catene laterali aromatiche della
proteina, e il fatto che lo spettro proteina mutante differisce da WT
suggerisce alterazione della struttura terziaria del dominio. Inoltre,
nessun cambiamento della fluorescenza è stato osservato dopo l’aggiunta di
calcio al mutante I318N né era il mutante capace di accelerare SNARE mediata
fusione delle membrane in presenza di calcio. Così, l’isoleucina
conservati è essenziale per una corretta struttura terziaria, e la sostituzione
con un asparagina comporta la perdita di attività del dominio C2B. Come
ulteriore controllo, due residui aspartato sono stati sostituiti con alanine
nel dominio C2C, e questa proteina mutante non è riuscito a stimolare le
reazioni di fusione della membrana SNARE-mediata in risposta al calcio, a
conferma della constatazione che i domini C2 da otoferlin sono in buona fede
calcio- funzionale I moduli di rilevamento.
In
sintesi, abbiamo dimostrato che otoferlin possiede la capacità di legare
calcio, membrane, e lacciuoli ed è in grado di accelerare direttamente SNARE
mediata fusione delle membrane. Tuttavia, alcune domande relative al
otoferlin e la sua funzione devono ancora essere affrontati. Un punto
critico riguarda la specificità lipidi legame di ciascun dominio C2. Questa
domanda è di particolare interesse perché le specificità dei lipidi di molti
domini C2 sono spesso su misura per le loro membrane di destinazione, e quindi,
visione questa specificità potrebbe far luce su dove, all’interno delle
cellule, le funzioni otoferlin.
Materiali
e metodi
Materiali e reagenti
Sintetico
DOPS (1,2-dioleoyl- sn -glycero-3-fosfo- L -serine),
DOPC (1,2-dioleoyl- sn -glycero-3-fosfocolina), POPC (sn 1-palmitoil-2-oleoyl-
-glycero-3-fosfocolina), PAPA (1-palmitoil-2-oleoyl- sn -glycero-3-fosfoetanolamina),
dansile-PE (1,2-dioleoyl- sn -glycero-3-phosphoethanolamine- N –
(5- dimetilammino-1-naphthalenesulfonyl)), NBD-PE (1,2-dipalmitoyl- sn -glycero-3-fosfo-ethanolamine- N –
(7-nitro-2-1,3-benzoxadiazol-4-il)), e rodamina-PE (N –
(lissamina rodamina B sulfonyl) -1,2-dipalmitoyl- sn -glycero-3-fosfoetanolamina)
sono stati acquistati da Avanti Polar Lipids, Inc. Affinity mezzi Ni 2 +
perline ad alte prestazioni -Sepharose sono stati ottenuti da GE Assistenza
sanitaria.Accudenz è stato ottenuto da accurata Chemical & Scientific
Corporation.
Plasmidi e purificazione della proteina
-cDNA
codificante del mouse otoferlin è stato fornito da C. Petit (Istituto Pasteur,
Parigi, Francia). Tutti i frammenti sono stati otoferlin subclonati in
pTrcHisA o vettori di espressione pGEX (Invitrogen) via BamHI e EcoRI ed
espressi in Escherichia coli come proteine
di fusione. Purificazione è stata effettuata essenzialmente
come descritto in precedenza (Gaffaney
et al., 2008). Le mutazioni puntiformi sono stati preparati utilizzando
un kit mutagenesi sito-diretta (QuikChange; Agilent Technologies). I
plasmidi per il mouse sinaptobrevina 2 e dell’eterodimero t-SNARE (topo
SNAP-25B e ratto sintaxina 1A) sono stati forniti da JE Rothman (Yale
University, New Haven, CT).Sinaptobrevina 2 e t-SNARE complesso sono stati
espressi come precedentemente descritto (Gaffaney
et al., 2008).
Liposomi senza proteine e SNARE portanti
Ricostituzione
di proteoliposomi SNARE è stata eseguita come precedentemente riportato(Gaffaney
et al., 2008). Proteoliposomi sinaptobrevina 2 v-SNARE sono stati
costituiti per il 30% in moli PAPA, 52% POPC, il 15% DOPS, 1,5% rodamina-PE
(accettore), e il 1,5% NBD-PE (donatore). Sintaxina 1A / SNAP-25B t-SNARE
proteoliposomi heterodimer erano composti da 30% in moli PAPA, il 55% in moli
POPC, e 15 moli% DOPS. Proteoliposomi conteneva ~100 copie di proteine
SNARE per liposomi. Liposomi contenenti proteine
sono formate mediante estrusione utilizzando una miscela lipidica
equivalente a quella dei proteoliposomi t-SNARE come descritto in
precedenza (Hui et
al., 2009).
Test di flottazione
Test di
flottazione utilizzando liposomi estrusi gratuito di proteine
sono state eseguite utilizzando le procedure descritte in
precedenza (Bhalla et
al., 2006; Gaffaney et al., 2008). Tutte le reazioni
otoferlin-liposoma-leganti sono stati eseguiti in entrambi 0,1 mM EGTA o 1 mM
di calcio libero in tampone Hepes (Hepes 10 mM e NaCl 100 mM, pH 7,5).15 micron
otoferlin è stata incubata con liposomi prima della miscelazione con una media
densità Accudenz. La miscela è stata sovrapposta al diminuire quantità di
Accudenz (35%, 30% e 0%). Dopo la centrifugazione, i liposomi
galleggiavano all’interfaccia 0/30% Accudenz insieme a tutti i frammenti
rilegati di otoferlin. Il campione a livello di interfaccia sono state
raccolte dall’interfaccia Accudenz, risolta mediante SDS-PAGE, e colorati con
Coomassie blu. I gel sono stati ripresi utilizzando uno scanner piano e
trattati con Illustrator (Adobe).
Saggi Fusion
Tutti i
saggi di fusione sono stati condotti utilizzando un 96 pozzetti lettore di
piastre (eccitazione 460-nm ed emissione 538-nm BioTek Instruments, Inc.), come
descritto in precedenza con piccole modifiche (Chicka et
al., 2008;. Gaffaney
et al, 2008) . Fusion campioni contenevano un volume totale di 75
microlitri con 30 microlitri purificati proteoliposomi t-SNARE, 15 microlitri
purificati proteoliposomi v-SNARE, 0,1 mM EGTA e 0-30 micron otoferlin proteina
in tampone Hepes. Per i campioni in cui è stato aggiunto il calcio, la
concentrazione di calcio libero era 1 mM. Al termine di ogni corsa, 0,5%
peso / volume n -dodecylmaltoside è stato aggiunto per
determinare la massima dequenched segnale di NBD. Fluorescenza Raw è stato
normalizzato per ottenere la massima percentuale di fluorescenza come descritto
in precedenza (Chicka et
al., 2008; Gaffaney et al., 2008).
Misure proteina fluorescente
Misure di
fluorescenza di residui nativi aromatici in vari frammenti otoferlin sono state
eseguite utilizzando un fluorimetro (QM-1; Photon International Technology) in
tampone Hepes più 0,1 mM EGTA utilizzando liposomi con una composizione
lipidica equivalente a quella dei liposomi t-SNARE. Per le titolazioni
calcio esperimenti, è stata utilizzata una soluzione madre Hepes tamponata di
cloruro di calcio, e la concentrazione di calcio libero è stato determinato
usando WebMaxC (www.stanford.edu/~cpatton/webmaxcS.htm).
Test Immunoprecipitazione
Esperimenti
di immunoprecipitazione sono stati eseguiti come precedentemente descritto(Hui et
al., 2009) con modifiche. 10 mM t-SNARE eterodimero è stato
incubato con 20 pM otoferlin dominio C2 in tampone Hepes più 0,5% Triton X-100
per 1 h in ghiaccio in presenza di 0,1 mM EGTA o 1 mM di calcio. t-SNARE
sono stati precipitati con l’aggiunta di 3 ml di un anticorpo monoclonale
diretto contro syntaxin (HPC-1) che è stato fornito da R. Jahn
(Max-Planck-Institut, Gottinga), seguita dall’aggiunta di 40 microlitri
proteine G- Sepharose Fast Flow tallone liquami (GE Healthcare). Dopo
1 h, perle sono state raccolte per centrifugazione e lavate quattro volte. Le
proteine di ogni campione sono state risolte mediante SDS-PAGE e
visibili con la colorazione Coomassie blu. I gel sono state digitalizzate
con uno scanner e trattati con Illustrator.
Intere
lisato cervello immunoprecipitazione sono stati effettuati utilizzando estratti
detergenti cervello di ratto che sono stati preparati come descritto in
precedenza(Chapman
et al., 1995; Lewis et
al., 2001). 1% Triton X-100 è stato utilizzato per la
solubilizzazione. Esperimenti di immunoprecipitazione sono state eseguite
come descritto in precedenza (Bai et
al., 2004). Per syntaxin 1A immunoprecipitazione, è stato utilizzato
l’anticorpo HPC-1. Immunoblots successivi a fronte di otoferlin usato un
anti-otoferlin monoclonale fornito da S. Safieddine (Université Pierre et Marie
Curie, Parigi, Francia).Per immunoprecipitazione otoferlin, un anticorpo
anti-otoferlin ottenuto da Abcam stata utilizzata seguita da immunoblotting con
l’anticorpo HPC-1 per rilevare syntaxin 1A.Pellicola Chemiluminescenza
(Research Products International Corp.) è stato utilizzato per visualizzare le
macchie. Macchie sono state digitalizzate con uno scanner da tavolo e
trattati con Illustrator.
Misure di torbidità
Esperimenti
di aggregazione di membrana sono state fatte attraverso il monitoraggio OD400 valori
utilizzando uno spettrofotometro UV-visibile (BioSpec-1601; Shimadzu
Corporation). 500 campioni contenevano microlitri liposomi (lipidi di 1
mm) composto da 55% POPC / 15% / 30% DOPS PAPA più il indicata otoferlin
frammento Hepes buffer e 100 micron EGTA; calcio viene aggiunto ad una
concentrazione finale di 1 mM, come indicato in fig. 1 – 8.
Saggi pull-down
Saggi
GST-pull down sono state eseguite come descritto in precedenza con 80 mcg
bead-immobilizzata GST-C2ABC o GST-C2DEF (Lewis et
al., 2001; Dong et al., 2003). In breve, i complessi
SNARE sono formate incubando 50 micron t-SNARE eterodimero e 50 micron
sinaptobrevina 2 notte a 4 ° C. I complessi SNARE sono stati incubati con
GST-otoferlin in tampone legante composto Hepes 10 mM, NaCl 100 mM, 0,5% Triton
X-100, e lo 0,1 mM EGTA o 1 mM di calcio. Dopo 1 h, le perle sono state
lavate tre volte con tampone di legame, e il campione è stato trattato con
tampone campione SDS, sottoposti a SDS-PAGE e visualizzati tramite
immunoblotting. Per blotting, è stato utilizzato l’anticorpo
anti-sintaxina HPC-1. Pellicola Chemiluminescenza è stato utilizzato per
visualizzare le macchie. Macchie sono state digitalizzate con uno scanner
da tavolo e trattati con Illustrator.
Materiale supplementare online
Fico. S1
mostra che otoferlin lega SNARE complessi ternari ma non si lega ai isolata
sinaptobrevina 2. fig. S2 mostra calcio dose-risposta per otoferlin
regolamentati SNARE mediata fusione delle membrane. Fico. S3 dimostra
quantificazione di 30 micron otoferlin C2 dominio stimolata SNARE mediata
fusione delle membrane. Fico. S4
mostra che la neutralizzazione del calcio putative ligandi D515 e 517 nel
dominio del C2C otoferlin abolisce fusione calcio-stimolata. Materiale
supplementare online è disponibile ahttp://www.jcb.org/cgi/content/full/jcb.201002089/DC1.
Ringraziamenti
Ringraziamo
M. Beurg e R. Fettiplace per discussioni costruttive.
Questo
lavoro è stato sostenuto dal National Institutes of Health (concedere MH
61876).ER Chapman è un Investigator del Howard Hughes Medical Institute.
Note
- Abbreviazioni
utilizzate in questo documento:
cd-SYB
dominio citoplasmatico di sinaptobrevina
cd-t-SNARE
dominio citoplasmatico dell’eterodimero t-SNARE
IHC
cellule ciliate interne
WT
tipo selvaggio
- Inviato: 16 febbraio, 2010
- Accettato: 7 Settembre 2010
References
1.
↵
1.
Bai, J.,
2.
C.T. Wang,
3.
D.A. Richards,
4.
M.B. Jackson,
5.
E.R. Chapman
. 2004. Fusion pore dynamics are
regulated by synaptotagmin*t-SNARE interactions. Neuron. 41:929–942.10.1016/S0896-6273(04)00117-5
2.
↵
1.
Bhalla, A.,
2.
M.C. Chicka,
3.
W.C. Tucker,
4.
E.R. Chapman
. 2006. Ca(2+)-synaptotagmin
directly regulates t-SNARE function during reconstituted membrane fusion. Nat.
Struct. Mol. Biol.13:323–330. 10.1038/nsmb1076
3.
↵
1.
Brose, N.,
2.
A.G. Petrenko,
3.
T.C. Südhof,
4.
R. Jahn
. 1992. Synaptotagmin: a calcium
sensor on the synaptic vesicle surface. Science. 256:1021–1025. 10.1126/science.1589771
4.
↵
1.
Chapman, E.R.
2008. How does synaptotagmin
trigger neurotransmitter release? Annu. Rev.
Biochem. 77:615–641. 10.1146/annurev.biochem.77.062005.101135
5.
↵
1.
Chapman, E.R.,
2.
P.I. Hanson,
3.
S. An,
4.
R. Jahn
. 1995. Ca2+ regulates the
interaction between synaptotagmin and syntaxin 1. J. Biol.
Chem. 270:23667–23671. 10.1074/jbc.270.40.23667
6.
↵
1.
Chicka, M.C.,
2.
E. Hui,
3.
H. Liu,
4.
E.R. Chapman
. 2008. Synaptotagmin arrests the
SNARE complex before triggering fast, efficient membrane fusion in response to
Ca2+. Nat. Struct. Mol. Biol. 15:827–835. 10.1038/nsmb.1463
7.
↵
1.
Davis, A.F.,
2.
J. Bai,
3.
D. Fasshauer,
4.
M.J. Wolowick,
5.
J.L. Lewis,
6.
E.R. Chapman
. 1999. Kinetics of synaptotagmin
responses to Ca2+ and assembly with the core SNARE complex onto
membranes. Neuron. 24:363–376. 10.1016/S0896-6273(00)80850-8
8.
↵
1.
Dong, M.,
2.
D.A. Richards,
3.
M.C. Goodnough,
4.
W.H. Tepp,
5.
E.A. Johnson,
6.
E.R. Chapman
. 2003.Synaptotagmins I and II mediate
entry of botulinum neurotoxin B into cells. J. Cell
Biol.162:1293–1303. 10.1083/jcb.200305098
9.
↵
1.
Earles, C.A.,
2.
J. Bai,
3.
P. Wang,
4.
E.R. Chapman
. 2001. The tandem C2 domains of
synaptotagmin contain redundant Ca2+ binding
sites that cooperate to engage t-SNAREs and trigger exocytosis. J. Cell
Biol. 154:1117–1123. 10.1083/jcb.200105020
10.
↵
1.
Fernandez, I.,
2.
D. Araç,
3.
J. Ubach,
4.
S.H. Gerber,
5.
O. Shin,
6.
Y. Gao,
7.
R.G. Anderson,
8.
T.C. Südhof,
9.
J. Rizo
. 2001. Three-dimensional structure
of the synaptotagmin 1 C2B-domain: synaptotagmin 1 as a phospholipid binding
machine. Neuron. 32:1057–1069.10.1016/S0896-6273(01)00548-7
11.
↵
1.
Gaffaney, J.D.,
2.
F.M. Dunning,
3.
Z. Wang,
4.
E. Hui,
5.
E.R. Chapman
. 2008. Synaptotagmin C2B domain
regulates Ca2+-triggered fusion in vitro: critical residues revealed by
scanning alanine mutagenesis. J. Biol.
Chem. 283:31763–31775. 10.1074/jbc.M803355200
12.
↵
1.
Glowatzki, E.,
2.
P.A. Fuchs
. 2002. Transmitter release at the
hair cell ribbon synapse. Nat.
Neurosci. 5:147–154. 10.1038/nn796
13.
↵
1.
Heidrych, P.,
2.
U. Zimmermann,
3.
A. Bress,
4.
C.M. Pusch,
5.
P. Ruth,
6.
M. Pfister,
7.
M. Knipper,
8.
N. Blin
.2008. Rab8b GTPase, a protein transport
regulator, is an interacting partner of otoferlin, defective in a human
autosomal recessive deafness form. Hum. Mol.
Genet. 17:3814–3821.10.1093/hmg/ddn279
14.
↵
1.
Heidrych, P.,
2.
U. Zimmermann,
3.
S. Kuhn,
4.
C. Franz,
5.
J. Engel,
6.
S.V. Duncker,
7.
B. Hirt,
8.
C.M. Pusch,
9.
P. Ruth,
10.
M. Pfister,
11.
et al
. 2009. Otoferlin interacts with
myosin VI: implications for maintenance of the basolateral synaptic structure
of the inner hair cell. Hum. Mol. Genet.18:2779–2790. 10.1093/hmg/ddp213
15.
↵
1.
Hui, E.,
2.
C.P. Johnson,
3.
J. Yao,
4.
F.M. Dunning,
5.
E.R. Chapman
. 2009. Synaptotagmin-mediated
bending of the target membrane is a critical step in Ca(2+)-regulated
fusion. Cell.138:709–721. 10.1016/j.cell.2009.05.049
16.
↵
1.
Lewis, J.L.,
2.
M. Dong,
3.
C.A. Earles,
4.
E.R. Chapman
. 2001. The transmembrane domain of
syntaxin 1A is critical for cytoplasmic domain protein-protein
interactions. J. Biol. Chem.276:15458–15465. 10.1074/jbc.M011687200
17.
↵
1.
Liberman, M.C.
1980. Morphological differences
among radial afferent fibers in the cat cochlea: an electron-microscopic study
of serial sections. Hear. Res. 3:45–63.10.1016/0378-5955(80)90007-6
18.
↵
1.
Longo-Guess, C.,
2.
L.H. Gagnon,
3.
D.E. Bergstrom,
4.
K.R. Johnson
. 2007. A missense mutation in the
conserved C2B domain of otoferlin causes deafness in a new mouse model of
DFNB9.Hear. Res. 234:21–28. 10.1016/j.heares.2007.09.005
19.
↵
1.
Martens, S.,
2.
M.M. Kozlov,
3.
H.T. McMahon
. 2007. How synaptotagmin promotes
membrane fusion. Science. 316:1205–1208. 10.1126/science.1142614
20.
↵
1.
Matthews, G.,
2.
P. Sterling
. 2008. Evidence that vesicles
undergo compound fusion on the synaptic ribbon. J.
Neurosci. 28:5403–5411. 10.1523/JNEUROSCI.0935-08.2008
21.
↵
1.
Migliosi, V.,
2.
S. Modamio-Høybjør,
3.
M.A. Moreno-Pelayo,
4.
M. Rodríguez-Ballesteros,
5.
M. Villamar,
6.
D. Tellería,
7.
I. Menéndez,
8.
F. Moreno,
9.
I. Del Castillo
. 2002. Q829X, a novel mutation in
the gene encoding otoferlin (OTOF), is frequently found in Spanish patients
with prelingual non-syndromic hearing loss. J. Med.
Genet. 39:502–506. 10.1136/jmg.39.7.502
22.
↵
1.
Mirghomizadeh, F.,
2.
M. Pfister,
3.
F. Apaydin,
4.
C. Petit,
5.
S. Kupka,
6.
C.M. Pusch,
7.
H.P. Zenner,
8.
N. Blin
. 2002. Substitutions in the
conserved C2C domain of otoferlin cause DFNB9, a form of nonsyndromic autosomal
recessive deafness. Neurobiol. Dis. 10:157–164.10.1006/nbdi.2002.0488
23.
↵
1.
Nalefski, E.A.,
2.
M.A. Wisner,
3.
J.Z. Chen,
4.
S.R. Sprang,
5.
M. Fukuda,
6.
K. Mikoshiba,
7.
J.J. Falke
.2001. C2 domains from different Ca2+
signaling pathways display functional and mechanistic diversity. Biochemistry. 40:3089–3100. 10.1021/bi001968a
24.
↵
1.
Popoli, M.,
2.
R. Paternò
. 1992. Isolated p65 protein
reproduces membrane binding activity of synaptic vesicles. Neuroreport. 3:177–180. 10.1097/00001756-199202000-00014
25.
↵
1.
Ramakrishnan, N.A.,
2.
M.J. Drescher,
3.
D.G. Drescher
. 2009. Direct interaction of
otoferlin with syntaxin 1A, SNAP-25, and the L-type voltage-gated calcium
channel Cav1.3. J. Biol. Chem.284:1364–1372. 10.1074/jbc.M803605200
26.
↵
1.
Rose, J.E.,
2.
J.F. Brugge,
3.
D.J. Anderson,
4.
J.E. Hind
. 1967. Phase-locked response to
low-frequency tones in single auditory nerve fibers of the squirrel monkey. J.
Neurophysiol.30:769–793.
27.
↵
1.
Roux, I.,
2.
S. Safieddine,
3.
R. Nouvian,
4.
M. Grati,
5.
M.C. Simmler,
6.
A. Bahloul,
7.
I. Perfettini,
8.
M. Le Gall,
9.
P. Rostaing,
10.
G. Hamard,
11.
et al
. 2006. Otoferlin, defective in a
human deafness form, is essential for exocytosis at the auditory ribbon synapse. Cell. 127:277–289.10.1016/j.cell.2006.08.040
28.
↵
1.
Safieddine, S.,
2.
R.J. Wenthold
. 1999. SNARE complex at the ribbon
synapses of cochlear hair cells: analysis of synaptic vesicle- and synaptic
membrane-associated proteins. Eur. J.
Neurosci. 11:803–812. 10.1046/j.1460-9568.1999.00487.x
29.
↵
1.
Schug, N.,
2.
C. Braig,
3.
U. Zimmermann,
4.
J. Engel,
5.
H. Winter,
6.
P. Ruth,
7.
N. Blin,
8.
M. Pfister,
9.
H. Kalbacher,
10.
M. Knipper
. 2006. Differential expression of
otoferlin in brain, vestibular system, immature and mature cochlea of the
rat. Eur. J.
Neurosci. 24:3372–3380. 10.1111/j.1460-9568.2006.05225.x
30.
↵
1.
Shao, X.,
2.
I. Fernandez,
3.
T.C. Südhof,
4.
J. Rizo
. 1998. Solution structures of the
Ca2+-free and Ca2+-bound C2A domain of synaptotagmin I: does Ca2+ induce a
conformational change?Biochemistry. 37:16106–16115. 10.1021/bi981789h
31.
↵
1.
Stein, A.,
2.
A. Radhakrishnan,
3.
D. Riedel,
4.
D. Fasshauer,
5.
R. Jahn
. 2007. Synaptotagmin activates
membrane fusion through a Ca2+-dependent trans interaction with
phospholipids.Nat. Struct. Mol.
Biol. 14:904–911. 10.1038/nsmb1305
32.
↵
1.
Sutton, R.B.,
2.
B.A. Davletov,
3.
A.M. Berghuis,
4.
T.C. Südhof,
5.
S.R. Sprang
. 1995. Structure of the first C2
domain of synaptotagmin I: a novel Ca2+/phospholipid-binding fold. Cell.80:929–938. 10.1016/0092-8674(95)90296-1
33.
↵
1.
Tekin, M.,
2.
D. Akcayoz,
3.
A. Incesulu
. 2005. A novel missense mutation in
a C2 domain of OTOF results in autosomal recessive auditory neuropathy. Am. J.
Med. Genet. A. 138:6–10.
34.
↵
1.
Therrien, C.,
2.
S. Di Fulvio,
3.
S. Pickles,
4.
M. Sinnreich
. 2009. Characterization of lipid
binding specificities of dysferlin C2 domains reveals novel interactions with
phosphoinositides.Biochemistry. 48:2377–2384. 10.1021/bi802242r
35.
↵
1.
Tucker, W.C.,
2.
T. Weber,
3.
E.R. Chapman
. 2004. Reconstitution of
Ca2+-regulated membrane fusion by synaptotagmin and SNAREs. Science. 304:435–438. 10.1126/science.1097196
36.
↵
1.
Vivian, J.T.,
2.
P.R. Callis
. 2001. Mechanisms of tryptophan
fluorescence shifts in proteins.Biophys. J. 80:2093–2109. 10.1016/S0006-3495(01)76183-8
37.
↵
1.
Weber, T.,
2.
B.V. Zemelman,
3.
J.A. McNew,
4.
B. Westermann,
5.
M. Gmachl,
6.
F. Parlati,
7.
T.H. Söllner,
8.
J.E. Rothman
. 1998. SNAREpins: minimal machinery
for membrane fusion. Cell.92:759–772. 10.1016/S0092-8674(00)81404-X
38.
↵
1.
Xue, M.,
2.
C. Ma,
3.
T.K. Craig,
4.
C. Rosenmund,
5.
J. Rizo
. 2008. The Janus-faced nature of
the C(2)B domain is fundamental for synaptotagmin-1 function. Nat.
Struct. Mol. Biol.15:1160–1168. 10.1038/nsmb.1508
39.
↵
1.
Yasunaga, S.,
2.
M. Grati,
3.
S. Chardenoux,
4.
T.N. Smith,
5.
T.B. Friedman,
6.
A.K. Lalwani,
7.
E.R. Wilcox,
8.
C. Petit
. 2000. OTOF encodes multiple long
and short isoforms: genetic evidence that the long ones underlie recessive
deafness DFNB9. Am. J. Hum. Genet. 67:591–600.10.1086/303049
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Andrij Z. Horodysky et al., Pending,
2008
2. Non-syndromic
recessive auditory neuropathy is the result of mutations in the otoferlin
(OTOF) gene.
R Varga et al., J Med Genet, 2003
3. 172 Junctophilin-2
interacts with the cardiac L-Type voltage-gated calcium channel
Kirsty Webb et al., Heart,
2015
APPROFONDIMENTO
Sordità OTOF-correlate
Sinonimi: DFNB9, DFNB9 non sindromica perdita dell’udito
Richard
JH Smith, MD, Jose G Gurrola, II, MD, e Philip M.
Kelley, PhD.
Pubblicazione
iniziale: 29 febbraio 2008; Ultima revisione: 14 Giugno 2011.
Riassunto
. Caratteristiche
della malattia di sordità OTOF connesse (DFNB9 perdita di
udito non sindromica) è caratterizzato da due fenotipi: perdita prelinguale non
sindromica udito e, meno frequentemente, non sindromica neuropatia uditiva
sensibile alla temperatura (TS-NSAN). La perdita di udito non sindromica è
bilaterale grave a profonda congenita sordità. Nei
primi uno o due anni di vita, sordità OTOF legati può sembrare
di essere una neuropatia uditiva basata su test elettrofisiologico in cui le
risposte del tronco cerebrale uditivo (ABR) sono assenti e le emissioni
otoacustiche (OAEs) sono presenti. Tuttavia, con il tempo OAE scompaiono e
test elettrofisiologico è più coerente con un difetto cocleare. La
distinzione tra neuropatia uditiva e un difetto cocleare è importante in quanto
gli impianti cocleari possono essere di valore marginale in persone con
neuropatia uditiva. TS-NSAN caratterizzata da perdita di udito normale a
lieve in assenza di febbre e perdita dell’udito significativa vanno da grave a
profonda in presenza di febbre. Quando la febbre si risolve, sentendo
ritorna normale.
Diagnosi
/ testing. La diagnosi di sordità OTOF legati si
sospetta basata su dati clinici, inclusi i risultati delle ABR se nelle fasi
iniziali. La diagnosi è confermata dal test
di genetica molecolare di OTOF, il genecodificante la proteina otoferlin. OTOF è
l’unico gene noto per essere associate a questa condizione.
Gestione Trattamento
delle manifestazioni:. Nei soggetti con non sindromica
bilaterale congenita perdita
di udito, apparecchi acustici nel più breve tempo possibile, la considerazione
di impianti cocleari, e programmi educativi progettati per le persone con danni
all’udito.
Prevenzione
delle manifestazioni primarie: Per gli individui con
TS-NSAN, prevenire febbri e le altre attività / condizioni ambientali che
potrebbero causare la temperatura corporea a salire.
Sorveglianza: Nei
soggetti con non sindromica bilaterale congenita perdita
di udito, esame annuale / semestrale da un medico familiarità con insufficienza
uditiva ereditaria, ripetere audiometria inizialmente ogni 3-6 mesi per
determinare se la perdita dell’udito è progressiva.
Valutazione
dei parenti a rischio: Valutazione di fratelli e sorelle
più presto possibile dopo la nascita per la perdita dell’udito; se sono
note le mutazioni che causano sordità in famiglia, test
di genetica molecolare di fratelli e sorelle poco dopo la
nascita in modo che un adeguato supporto e la gestione precoce può essere
fornita al bambino e alla famiglia.
La
consulenza genetica. OTOF legati sordità è ereditata come autosomica
recessiva modo. Al momento del concepimento, ogni sib di un
individuo con sordità OTOF legate ha una probabilità del 25%
di avere sordità OTOF-correlati, una probabilità del 50% di
essere un elemento
portante , e una probabilità del 25% di essere inalterato e
non un vettore. Gli eterozigoti (portatori) sono asintomatici. Test
di vettore per a rischio parenti e test prenatale per gravidanze a rischio
aumentato sono possibili se si conoscono le mutazioni che causano sordità in
una famiglia.
Diagnosi
Diagnosi clinica
Sordità OTOF connesse
(perdita di udito non sindromica al DFNB9 locus )
è caratterizzata da bilaterale grave da profonda congenita sordità.
Nei
primi uno o due anni di vita, sordità OTOF legati può sembrare
di essere una neuropatia uditiva basata su test elettrofisiologico in cui le
risposte del tronco cerebrale uditivo (ABR) sono assenti e le emissioni
otoacustiche (OAEs) sono presenti. Tuttavia, con il tempo OAE scompaiono e
test elettrofisiologico diventa più coerente con un difetto cocleare.
Molecular Genetic
Testing
Gene. OTOF legati
sordità è causata da mutazioni in OTOF, che codifica per la
proteina otoferlin.
Sperimentazione
clinica
·
L’analisi di sequenza di OTOF. La mutazione frequenza
di rilevamento per l’analisi
di sequenza si avvicina al 99%.
·
Multi- gene pannelli. Sebbene
test singolo gene per OTOF viene eseguita in un numero di
laboratori, in test genetici generale dell’udito è avanzata verso metodi di
analisi multi-gene in cui nuovi metodi di DNA analisi
possono essere utilizzate per l’analisi simultanea di numerosi geni associati
alla perdita dell’udito ereditaria [ Shearer et al 2010 ]. Questi
pannelli variano da metodi utilizzati ed i geni inclusi; quindi, la
capacità di un pannello per rilevare un causativo mutazione o
mutazioni in un dato individuo varia.
Tabella 1. Summary of Molecular Genetic Testing Utilizzato in
Sordità OTOF-correlate
|
Gene Symbol |
Metodo di |
Mutazioni |
L’identificazione |
|
OTOF |
L’analisi di |
Varianti di |
99% |
1.
La capacità del metodo di prova utilizzato per rilevare una mutazione che
è presente nel indicata gene
2.
Esempi di mutazioni identificate da analisi
di sequenza possono includere piccole delezioni intrageniche /
inserimenti e missense, nonsense, e sito di splice mutazioni.
Interpretazione dei
risultati del test. Per le questioni da considerare nell’interpretazione
di analisi
di sequenza dei risultati, fare clic qui .
Strategia di
sperimentazione
Per
confermare / stabilire la diagnosi di un probando . In
un bambino con grave a profonda bilateralecongenita sordità
in cui la storia clinica e un esame fisico sono coerenti con la diagnosi
di autosomica
recessivaperdita di udito non sindromica, le seguenti strategie di
sperimentazione si basano su genetica
molecolare test :
·
Sequential test
di genetica molecolare di singoli geni:
o Prima
eseguire test
di genetica molecolare di GJB2 (vedi non
sindromica Perdita dell’udito e sordità, DFNB1 ); se
solo un GJB2 mutazione viene
rilevato, effettuare la
cancellazione / analisi di GJB6
o Se il
test di genetica molecolare per mutazioni nella DFNB1 locus (mutazioni
intragenicheGJB2 e delezioni GJB6) non identifica
due mutazioni che causano sordità, eseguire TC o RMN delle ossa temporali per
valutare la dilatazione dell’acquedotto vestibolare (DVA) e Mondini displasia:
§ La
presenza di uno di questi dell’osso temporale anomalie warrant test
di genetica molecolare di SLC26A4. (Vedere Pendred
Syndrome/DFNB4 .)
§ Se
queste anomalie delle ossa temporali non sono presenti, test
di genetica molecolare dovrebbe essere considerato
di OTOF.
E /
O
·
Utilizzo di un pannello multigene che
analizza simultaneamente più geni associati con perdita uditiva ereditaria
Poiché
i test elettrofisiologico eseguito su un bambino con sordità OTOF legati
durante il primo anno o due di vita può essere coerente con neuropatia
uditiva, OTOF test
di genetica molecolare è garantito in tutti i bambini
con congenita neuropatia
uditiva senza una storia di fattori ambientali causali (ad esempio,
iperbilirubinemia neonatale e ipossia neonatale). Tuttavia, l’assenza di
evidenza elettrofisiologica di neuropatia uditiva non esclude la
sordità OTOF legate perché con il tempo OAE scompaiono e
risultati dei test elettrofisiologico diventano più coerente con un difetto
cocleare.
Test
di vettore per a rischio parenti richiede la preventiva
identificazione delle mutazioni che causano sordità in famiglia.
Nota:
I vettori sono eterozigoti per questa autosomica
recessiva condizioni e non sono a rischio di sviluppare la malattia.
La
diagnosi prenatale per gravidanze a rischio richiede la preventiva
identificazione delle mutazioni che causano sordità in famiglia.
Geneticamente correlati
(alleliche) Disturbi
Perdita
di udito non sindromica è l’unico fenotipo note
per essere associate con mutazioni in OTOF.
Descrizione
clinica
Storia Naturale
I due fenotipi
osservati nei sordità OTOF connesse sono la perdita di udito
non sindromica prelinguale e, meno frequentemente, non sindromica neuropatia
uditiva sensibile alla temperatura (TS-NSAN).
Perdita di udito non
sindromica OTOF legata è caratterizzato da prelinguale,
sordità in genere gravi a profonde, senza anomalie dell’orecchio interno su RM
o TAC esame delle ossa temporali. Grave sordità è definita come la perdita
di 71-90 dB dell’udito; sordità profonda è una perdita uditiva superiore a
90 dB.
TS-NSAN presenta
tipicamente con la perdita normale-to-mite udienza quando l’individuo è
afebbrili. Con la comparsa di febbre, persone con TS-NSAN hanno una
significativa perdita di udito vanno da grave a profonda; udito torna alla
normalità quando la febbre è stato risolto. Discriminazione vocale è stata
descritta come normale diminuita leggermente al basale con un significativo
peggioramento durante i periodi febbrili.
Genotipo-fenotipo
Correlazioni
Solo limitato genotipo – fenotipo correlazioni
sono state fatte, coinvolgendo principalmente i rapporti di
temperatura-sensibili non sindromica neuropatia uditiva (TS-NSAN).
·
Un missense allele , c.1544T> C (p.Ile515Thr) , è stato
trovato in stato di eterozigote in un individuo che è stato osservato per avere
TS-NSAN [ Varga
et al 2006 ].
·
Una delezione , c.5410_5412delGAG (p.Glu1804del) ,
è stato segnalato per essere omozigote in tre membri di una famiglia con simili
TS-NSAN [ Marlin
et al 2010 ].
·
Un individuo è stato trovato per avere c.2975_2976delAG (p.Gln994Valfs * 7) e c.4819C> T (p.Arg1607Trp) mutazioni
in OTOF su iter per il TS-NSAN [ Wang
et al 2006 ].
Nomenclatura
La diversa gene loci
per la sordità non sindromica sono designati DFN (per d bis fn ess).
Loci sono denominati
in base a modalità
di trasmissione :
·
DFNA: autosomica
dominante
·
DFNB: autosomica
recessiva
·
DFN: X-linked
Il numero che segue
le designazioni di cui sopra riflette l’ordine del gene mappatura
e / o la scoperta.
Prevalenza
La prevalenza
mondiale di mutazioni OTOF nelle persone con grave a
profonda congenita autosomica
recessiva sordità sindromica rimane sconosciuto.
·
Studi in popolazioni spagnole suggeriscono che OTOF può
essere responsabile per il 5% -8% dei prelinguale autosomica
recessiva perdita di udito [ Rodríguez-Ballesteros
et al 2008 ].
·
Uno studio nella popolazione pakistana suggerisce che la frequenza
di alleli mutanti è circa 2,3% in persone con recessiva congenita /
prelinguale insorgenza da grave a profonda sordità [ Choi
et al 2009 ].
Diagnosi
differenziale
Congenita (o
prelinguale) ereditata ipoacusia colpisce circa uno su 1.000
neonati. Trenta per cento di questi bambini hanno anomalie aggiuntive,
rendendo la diagnosi di una forma sindromica di ipoacusia possibile
(vedere ereditaria
Sordità e perdita dell’udito panoramica ). Nei paesi
sviluppati, circa la metà dei restanti figli (cioè il 70% con problemi di udito
non sindromica) segregare mutazioni in GJB2 [ Smith
et al 2005 ].
Le mutazioni in 28
geni (tra cui OTOF) sono stati implicati in congenita autosomica
recessiva sordità sindromica. La prevalenza delle mutazioni OTOF nella
popolazione congenitamente sordi è nota; mutazioniOTOF può essere
una causa comune di isolato neuropatia
uditiva durante i primi uno o due anni di vita.Tuttavia, è importante notare
che con il tempo OAE scompare ei risultati dei test elettrofisiologico sono più
coerenti con un difetto cocleare.
Altre neuropatie
ereditarie non sindromiche uditive sono i seguenti:
·
DFNB59, autosomica
recessiva neuropatia uditiva causata da mutazioni nel PJVK, il gene che
codifica la proteina pejvakin [ Delmaghani
et al 2006 , Schwander et al 2007 ]
·
Autosomica dominante neuropatia
uditiva associato al AUNA1 locus ( cromosoma 13q14-q21)
[Kim
et al 2004 ]
Mutazioni OTOF sono
estremamente improbabile in un bambino con ipoacusia grave-to-profonda in un
solo orecchio e le risposte elettrofisiologiche coerente con neuropatia
uditiva. Invece, un difetto cocleare deve essere considerato; RM è
indicata [ Buchman
et al 2006 ].
Nota per i medici: per
un paziente-specifico ‘simultaneo consultare’ legate a questa condizione,
andare a 
,
Un sistema diagnostico strumento interattivo decisione supporto software che
fornisce diagnosi differenziali basate sui risultati dei pazienti
(registrazione o di accesso istituzionale necessario).
Gestione
Valutazioni dopo la
diagnosi iniziale
Per stabilire la
misura del coinvolgimento in un individuo con diagnosi di sordità OTOF-correlati, le
seguenti valutazioni sono raccomandati (cfr. Hereditary
Deafness and Hearing Loss Panoramica ):
·
Valutazione della acuità uditiva (prove di emissione ABR,
audiometria tonale)
·
Thin-cut CT delle ossa temporali per individuare anomalie
strutturali
Trattamento delle
manifestazioni
Vedere ereditaria
Sordità e perdita dell’udito Panoramica per i dettagli.
Audizione
abilitazione per quelli con non sindromica bilaterale congenita perdita
dell’udito
·
Gli apparecchi acustici devono essere montati il più
presto possibile.
·
L’impianto cocleare (CI) deve essere considerato. CI è stato
realizzato con successo in due bambini con sordità OTOF legati
[ Rouillon
et al 2006 ].
Nota: Nei primi uno o due anni di vita, sordità OTOF legati
può sembrare di essere una neuropatia uditiva basata su test
elettrofisiologico; Tuttavia, con il tempo di test elettrofisiologico
diventa più consistente con un difetto cocleare. Distinguere tra una
neuropatia uditiva e un difetto cocleare è importante in quanto gli impianti
cocleari possono essere di valore marginale nei soggetti con neuropatia uditiva
come quello osservato nella sordità-distonia
ottica neuronopathy (ddon) [Brookes
et al 2008 ].
I programmi educativi progettati
per le persone con ipoacusia sono appropriati.
Prevenzione delle
manifestazioni primarie
Per gli individui con
TS-NSAN:
·
Prevenire episodi febbrili.
·
Evitare il livello di esercizio e / o condizioni ambientali che
potrebbero causare la temperatura corporea a salire.
·
Trattamento di episodi febbrili più rapidamente possibile
ritornare alla normale temperatura corporea.
·
Fai pazienti e operatori sanitari consapevoli del fatto che
l’insorgenza di perdita dell’udito può essere il primo segno di un evento
pyretic / infettiva che richiede un trattamento [ Starr
et al 1998 ].Occorre incoraggiare le opportune precauzioni, tra cui
evitare situazioni potenzialmente pericolose o rumorosi.
Sorveglianza
Gli individui con non
sindromica bilaterale congenita perdita
di udito:
·
Esaminare semestralmente o annualmente da un medico familiarità
con insufficienza uditiva ereditaria.
·
Ripetere audiometria inizialmente ogni 3-6 mesi per determinare se
la perdita dell’udito è progressiva.
Agenti / Circostanze da
evitare
Gli individui con
TS-NSAN. Evitare e / o curare le temperature corporee eccessive
quando possibile. Studi di follow-up non hanno dimostrato il successo
delle misure preventive come un efficace trattamento a lungo termine in questa
popolazione di pazienti. Continua la valutazione e il follow-up dovrebbe
essere incoraggiata.
Valutazione dei parenti
a rischio
A rischio i parenti
dovrebbero essere valutati per la perdita e la neuropatia uditiva (che può
essere presente durante l’infanzia) dell’udito.
Se si conoscono le
mutazioni specifiche per famiglie, test
di genetica molecolare di fratelli e sorelle è opportuno
subito dopo la nascita in modo che il sostegno e la gestione adeguata e precoce
possono essere forniti per il bambino e la famiglia.
Vedere la
consulenza genetica per le questioni relative alle prove di a rischio parenti
per consulenza
geneticascopi.
Terapie sotto inchiesta
Cerca ClinicalTrials.gov per
l’accesso alle informazioni sugli studi clinici per una vasta gamma di malattie
e condizioni. Nota: Non ci può essere studi clinici per questa condizione.
La
consulenza genetica
La consulenza
genetica è il processo di fornire individui e famiglie, con informazioni sulla
natura, eredità, e le implicazioni di malattie genetiche per aiutarli a
prendere decisioni personali e mediche informate. La
sezione seguente si occupa di valutazione del rischio genetico e l’uso della
storia della famiglia e il test genetico per chiarire lo status genetico per i
familiari. Questa sezione non è destinata ad affrontare tutte le
questioni personali, culturali o etici che gli individui possono affrontare o
per sostituire la consultazione con una genetica professionali. -ED.
Modalità di ereditarietà
Sordità OTOF relativi
viene ereditata in un autosomica
recessiva modo.
Rischio per i membri
della famiglia
I genitori di
un probando
·
I genitori di un bambino con sordità OTOF connesse
sono eterozigoti obbligati e quindi portano uno-sordità causa allele .
·
Gli eterozigoti (portatori) sono asintomatici.
Fratelli e sorelle di
un probando
·
Al momento del concepimento, ogni sib di un individuo con
sordità OTOF legate ha una probabilità del 25% di essere
sordo, una probabilità del 50% di essere un elemento
portante , e una probabilità del 25% di essere inalterato e
non un vettore.
·
Una volta che un sib a rischio è noto per essere udito, la
probabilità della sua / il suo essere unelemento
portante è di 2/3.
·
Gli eterozigoti (portatori) sono asintomatici.
Offspring
of a proband . The offspring of an
individual with OTOF -related deafness are obligate
heterozygotes (carriers) for a deafness-causing mutation in OTOF .
Other
family members of a proband . For each sib of the
proband’s parents, the probability of being acarrier is 50%.
Rilevamento Carrier
Carrier
testing for at-risk family members is possible if the deafness-causing
mutations have been identified in the family.
Genetica correlati
Counseling Problemi
See
Management, Evaluation of Relatives at Risk for
information on testing at-risk relatives for the purpose of early diagnosis and
treatment.
Family planning
·
The optimal time for determination of genetic risk, clarification
of carrier status, and discussion
of the availability of prenatal testing is before pregnancy.
·
It is appropriate to offer genetic counseling (including
discussion of potential risks to offspring and reproductive options) to young
adults who are affected , are carriers, or are
at risk of being carriers.
The
following points are noteworthy:
·
Communication with individuals who are deaf requires the services
of a skilled interpreter.
·
Deaf persons may view deafness as a distinguishing characteristic
and not as a handicap, impairment, or medical condition requiring a
“treatment” or “cure,” or to be “prevented.” In
fact, having a child with deafness may be preferred over having a child with
normal hearing.
·
Many deaf people are interested in obtaining information about the
cause of their own deafness, including information on medical, educational, and
social services, rather than information about prevention, reproduction, or
family planning. As in all genetic counseling , it is
important for the counselor to identify, acknowledge, and respect the
individual’s/family’s questions, concerns, and fears.
·
The use of certain terms is preferred: probability or chance vs
risk; deaf and hard-of-hearing vs hearing impaired. Terms such as ” affected ,”
“abnormal,” and “disease-causing” should be avoided.
DNA banking is the storage
of DNA (typically extracted from white blood cells) for possible future use.
Because it is likely that testing methodology and our understanding of genes,
mutations, and diseases will improve in the future, consideration should be
given to banking DNA of individuals who are deaf or hard of hearing.
Test prenatale
Prenatal
diagnosis for pregnancies at increased risk is possible by analysis of DNA extracted from fetal
cells obtained by amniocentesis usually performed at approximately 15 to 18
weeks’ gestation or chorionic villus sampling (CVS) at approximately ten to 12
weeks’ gestation. Both deafness-causing alleles must be identified before
prenatal testing can be performed.
Nota: l’età
gestazionale è espresso in settimane mestruali calcolati sia dal primo giorno
dell’ultimo periodo mestruale normale o da misure ad ultrasuoni.
Requests
for prenatal testing for conditions which (like OTOF -related
deafness) do not affect intellect or life span are not common. Possono
esistere differenze di prospettiva tra i professionisti medici e all’interno
delle famiglie riguardo l’uso di test prenatale, in particolare se il test
viene considerato ai fini della interruzione della gravidanza, piuttosto che la
diagnosi precoce. Although decisions regarding
prenatal testing are the choice of the parents, discussion of these issues is
appropriate.
Preimplantation
genetic diagnosis (PGD) may be an option for
some families in which the deafness-causing mutations have been identified.
Risorse
GeneReviews
staff has selected the following disease-specific and/or umbrella support
organizations and/or registries for the benefit of individuals with this
disorder and their families. GeneReviews is not responsible for the information
provided by other organizations. For information on selection
criteria, click here .
·
Alexander Graham Bell Association for the Deaf and Hard of Hearing
3417
Volta Place Northwest
Washington
DC 20007
Phone: 866-337-5220 (toll-free); 202-337-5220; 202-337-5221 (TTY)
Fax: 202-337-8314
Email: info@agbell.org
·
American Society for Deaf Children (ASDC)
800
Florida Avenue Northeast
#
2047
Washington
DC 20002-3695
Phone: 800-942-2732 (Toll-free Parent Hotline); 866-895-4206 (toll
free voice/TTY)
Fax: 410-795-0965
Email: info@deafchildren.org; asdc@deafchildren.org
·
my baby’s hearing
This
site, developed with support from the National Institute on Deafness and Other
Communication Disorders, provides information about newborn hearing screening
and hearing loss.
·
National Association of the Deaf (NAD)
8630
Fenton Street
Suite
820
Silver
Spring MD 20910
Phone: 301-587-1788; 301-587-1789 (TTY)
Fax: 301-587-1791
Email: nad.info@nad.org
·
National Library of Medicine Genetics Home Reference
·
NCBI Genes and Disease
Genetica
molecolare
Information
in the Molecular Genetics and OMIM tables may differ from that elsewhere in the
GeneReview: tables may contain more recent information. — ED.
Table A. OTOF-Related Deafness: Genes and Databases
|
Locus |
Gene |
Cromosomica |
Proteine |
Locus |
HGMD |
|
DFNB9 |
Sordità |
I
dati sono compilati dai seguenti riferimenti standard: Simbolo gene da HGNC ; cromosomico
luogo, nome luogo, regione critica, complementazione gruppo da OMIM ; Nome
proteine UniProt . Per
una descrizione di basi di dati (Locus Specific, HGMD) per cui sono previsti
collegamenti, fare clic qui .
Tabella
B. OMIM Inserzioni per Sordità OTOF-correlati ( Visualizza
tutto in OMIM )
|
SORDITA ‘, AUTOSOMICA RECESSIVA |
|
|
Otoferlin; OTOF |
Molecular Genetic
Patogenesi
Otoferlin appartiene
ad una piccola famiglia di proteine citosoliche membrana ancorata
che include dysferlin (codificata dal DYSF), myoferlin
(codificata dal MYOF), e un quarto membro predetto FER1L4
(codificata dal FER1L4). I geni Ferlin sono così chiamati a
causa della loro somiglianza strutturale di un gene trovato
inC. elegans, fer-1, che è richiesto per la normale
maturazione degli spermatozoi.
Con l’eccezione
di OTOF, perdita dell’udito non è stato associato con i membri
di questo gene famiglia DYSFè
associato con tre diversi tipi di miopatie distali:. Miyoshi miopatia (MM),
arti-distrofia muscolare dei cingoli di tipo 2B (LGMD2B), e miopatia distale
con tibiale anteriore esordio (DMAT) [ Bashir et al 1998 , Liu
et al 1998 , Weiler et al 1999 ] (vedere Dysferlinopathy ). Myoferlin, che è
codificata dal FER1L3, è necessaria per la normale fusione dei
mioblasti [ Doherty
et al 2005 ]. La funzione di FER1L4 non è nota ( Figura 1 ).
Figura 1. Protein organizzazione motivi per la famiglia Ferlin
gene umano come determinato da SMART [Schultz et al 1998, Letunic et al
2002]
C2 (verde) è il motivo legante il calcio.
CC (giallo) è un dominio coiled-coil.
TM (blu) è (continua. ..)
Nel topo, otoferlin è
espresso in cocleare, vestibolare, e tessuto cerebrale [ Yasunaga
et al 1999 ]. Cervello di topo e coclea hanno distinte isoforme che differiscono principalmente
nella inclusione di esoni 6 e 47. La conseguenza di inclusione di questi esone è
una sequenza proteica distinta C-terminale. Fatta eccezione per l’assenza
di un breve isoforma topo, isoforma espressione tessuto-specifica è concorde
tra topo e umana [Yasunaga
et al 2000 ]. Nella coclea, otoferlin si crede di svolgere un
ruolo nella esocitosi delle vescicole sinaptiche al nastro sinapsi uditivo
delle cellule ciliate interne [ Roux
et al 2006 ].
Varianti alleliche
normali. OTOF costituito da 48 esoni codificanti che si
estendono oltre 100 kb di genomica DNA . Le
brevi isoforme hanno solo tre domini
C2. Un certo numero di varianti alleliche non patogeni sono stati
descritti (vedi Tabella
3 ).
Varianti alleliche
patologiche. Le 24 mutazioni patologiche che sono stati riportati
in OTOF (vedi Tabella
4) sono distribuiti in tutto il gene . La
maggior parte sono previsti da mutazioni inattivanti e sono associati con
sordità grave a profonda [ Yasunaga
et al 1999 , Adato et al 2000 , Yasunaga
et al 2000 , Houseman et al 2001 , Migliosi
et al 2002 , Mirghomizadeh et al 2002 , Rodríguez-
Ballesteros et al 2003 , Varga
et al 2003, Hutchin
et al 2005 , Tekin
et al 2005 , Rouillon
et al 2006 , Varga
et al 2006 ]. No mutations have been
reported to be more frequent in specific ethnic groups with the exception of
c.2485C>T (p.Gln829*), which is present in 3%-5% of the Spanish population
with severe-to-profound nonsyndromic, prelingual deafness [Migliosi et al 2002 , Rodríguez-Ballesteros et al 2003 ]
( Figure 2 ).
Figure 2. Schematic of OTOF on chromosome 2p23. The OTOF genomic
structure comprises 48 exons that are used to transcribe the long isoform
(NM_194248.1; NP_919224.1). The short isoform does not include the first 19
exons, which are shown as blue bars. (more…)
Table
2. Selected OTOF Pathologic Allelic Variants
|
DNA Nucleotide |
Proteina Amino |
Riferimenti |
Sequenze di |
|
c.1544T>C |
p.Ile515Thr |
||
|
c.2485C>T |
p.Gln829 * |
||
|
c.2975_2976delAG |
p.Gln994Valfs |
||
|
c.4819C> T |
p.Arg1607Trp |
||
|
c.5410_5412delGAG |
p.Glu1804del |
Nota
sulla classificazione variante:. Varianti elencati nella tabella sono stati
forniti dall’autore (s) PersonaleGeneReviews non sono verificate in
modo indipendente la classificazione delle varianti.
Nota
sulla nomenclatura: GeneReviews segue le convenzioni di
denominazione standard della Human Genome Variation Society ( www .
Hgvs.org ). Vedere Riferimento
rapido per una spiegazione di nomenclatura.
1.
Designazione Variant che non è conforme alle convenzioni di denominazione
corrente
Normali prodotti
genici . splicing alternativo trascrizioni combinato con l’uso di
diversi differenti traduzioneiniziazione siti comportare più
corte e lunghe isoforme della proteina [ Yasunaga
et al 1999 , Yasunaga
et al 2000 ]. I primi 19 esoni sono unici per le lunghe isoforme,
che contengono sei moduli strutturali leganti il calcio chiamate
domini C2 essenziali per la fusione delle vescicole membrana, un dominio
coiled-coil, e un dominio transmembrana. Le lunghe isoforme di otoferlin
hanno 1997 amminoacidi con sei C2 domini, un dominio coiled-coil, e un dominio
transmembrana, e portano omologia con la proteina sinaptica vescicola
synaptotagamin. I domini C2 legano i fosfolipidi in presenza di calcio e
sono implicati nella fusione delle membrane. Roux
et al [2006] ipotizzare che otoferlin è richiesto per l’alto tasso di
fusione delle vescicole sinaptiche nelle cellule ciliate interne.
Anormale prodotto
genico . Diciassette delle note 24 mutazioni patologiche sono
mutazioni inattivanti che portano alla grossolanamente proteina anormale o, in
caso di nonsense-mediata mRNA decay, nessuna proteina affatto. Molte
persone con sordità OTOF connesse sono due mutazioni
inattivanti, suggerendo che la sordità profonda associata a questo genotipo riflette
la totale assenza di otoferlin. Nelle persone che sono eterozigoti
composti per due mutazioni missense, o un inattivante mutazione e
una mutazione
missense , la mutazione missense è previsto un funzionamento
difettoso. Sia disfunzione (a) altera i tempi di fusione della vescicola
sinaptica, determinando così una perdita di codifica temporale (dissincronia
uditiva), o (b) si accumula nelle vescicole perturbano trasporto nelle cellule
ciliate interne non è noto. E ‘possibile che le differenze funzionali
possono essere associati con differenze fenotipiche riflesse dalle differenze
di acuità uditiva, anche se sono necessari ulteriori studi per stabilire se
eventuali fenotipo esistono
correlazioni genotipo-in associazione con proteine otoferlin anormale.
Riferimenti
Letteratura citata
1.
Adato A, Raskin L, Petit C, Bonne-Tamir B. Sordità eterogeneità in
un druso isolare dal Medio Oriente: il romanzo OTOF e mutazioni PDS, bassa
prevalenza di GJB2 35delG mutazione e l’indicazione di un nuovo locus
DFNB Eur J Hum Genet.. . 2000; 8 :437-42 [ ]
2.
Bashir R, S Britton, Strachan T, Keers S, Vafiadaki E, Lako M,
Riccardo I, Marchand S, Bourg N, Z Argov, Sadeh M, Mahjneh ho, Marconi G,
Passos-Bueno MR, Moreira Ede S, M Zatz , Beckmann JS, Bushby K. Un gene
correlato al Caenorhabditis elegans fattore spermatogenesi fer-1 è mutato in
arti-distrofia muscolare dei cingoli di tipo 2B Nat
Genet 1998; 20 :37-42 [… ]
3.
Brookes JT, Kanis AB, Tan LY, Tranebjaerg L, Vore A, RJ
Smith. L’impianto cocleare in sordità-distonia ottica neuronopathy (ddon)
sindrome Int J Pediatr Otorhinolaryngol 2008; 72 :121-126 […]
4.
Buchman CA, Roush PA, Teagle HF, CJ Brown, Zdanski CJ, Grose
JH. … Caratteristiche neuropatia uditiva nei bambini con deficit nervo
cocleare Ascolta Ear 2006; 27 :399-408 [ ]
5.
Choi BY, Ahmed ZM, Riazuddin S, Bhinder MA, Shahzad M, Husnain T,
Riazuddin S, Griffith AJ, Friedman TB. Identità e frequenze di
mutazioni del gene otoferlin (OTOF) causando DFNB9 sordità in
Pakistan Clin Genet 2009; 75 :237-43 [… PMC
libero ] [ ]
6.
Delmaghani S, del Castillo FJ, Michel V, Leibovici M, Aghaie A,
Ron U, Van Laer L, Ben-Tal N, Van Camp G, Weil D, F Langa, Lathrop M, Avan P,
Petit C. Le mutazioni nel gene codificante pejvakin, una proteina recentemente
identificata del percorso uditivo afferente, causa DFNB59 neuropatia
uditiva Nat Genet 2006; 38 :770-8 [… ]
7.
Doherty KR, Cave A, Davis DB, Delmonte AJ, Posey A, Earley JU,
Hadhazy M, McNally EM.Normale mioblasti fusione richiede
myoferlin Sviluppo 2005; 132 :5565-75 [… PMC
libero ] [ ]
8.
Houseman MJ, Jackson AP, Al-Gazali LI, Badin RA, Roberts E,
Mueller RF. Una nuova mutazione in una famiglia con ipoacusia
neurosensoriale non sindromica che sconvolge i neo caratterizzati isoforme OTOF
lunghe J Med Genet 2001; 38:.. E25 [. PMC
libero ] [ ]
9.
Hutchin T, Coy NN, Conlon H, Telford E, Bromelow K, Blaydon D,
Taylor G, Coghill E, Brown S, Trembath R, Liu XZ, Bitner-Glindzicz M, Mueller
R. La valutazione delle cause genetiche della recessiva non infanzia sindromica
sordità nel Regno Unito – le implicazioni per i test genetici Clin
Genet 2005; 68 :506-12 [… ]
10. Kim TB, Isaacson B, Sivakumaran TA, Starr A, Keats BJ, Lesperance
MM. Un gene responsabile della neuropatia uditiva autosomica dominante
(AUNA1) mappa to 13q14-21 J Med
Genet 2004;41 :872-6 [… PMC
libero ] [ ]
11. Letunic
Io, Goodstadt L, Dickens NJ, Doerks T, Schultz J, Mott R, F Ciccarelli, Copley RR,
Ponting CP, Bork P. recenti miglioramenti alla SMART risorsa sequenza di
annotazioni di dominio basato su acidi nucleici
Res 2002 30..: 242-4 [. PMC
articolo ] [ ]
12. Liu
J, M Aoki, Illa I, Wu C, Fardeau M, Angelini C, Serrano C, Urtizberea JA,
Hentati F, Hamida MB, Bohlega S, Culper EJ, Amato AA, Bossie K, Oeltjen J, K
Bejaoui, McKenna- Yasek D, Hosler BA, Schurr E, Arahata K, de Jong PJ, Brown
RH. Dysferlin, un nuovo gene muscolo scheletrico, è mutato in Miyoshi
miopatia e distrofia muscolare dei cingoli Nat
Genet 1998; 20 :31-6[… ]
13. Marlin
S, Feldmann D, Nguyen Y, Rouillon io, Loundon N, Jonard L, Bonnet C, Couderc R,
Garabedian IT, Petit C, Denoyelle F. neuropatia uditiva sensibile alla
temperatura associata ad una mutazione otoferlin: febbre
assordante Biochem Biophys Res ..
Commun 2010; 394 :737-42 [ ]
14. Migliosi
V, Modamio-Hoybjor S, Moreno-Pelayo MA, Rodriguez-Ballesteros M, Villamar M,
Telleria D, Menendez io, Moreno F, Del Castillo I. Q829X, una nuova mutazione
nel gene che codifica otoferlin (OTOF), è frequentemente trovato in pazienti
spagnoli con perdita di udito non sindromica prelinguale J Med
Genet 2002; 39 :502-6 [… PMC
libero ] [ ]
15. Mirghomizadeh
F, Pfister M, Apaydin F, Petit C, Kupka S, Pusch CM, Zenner HP, Blin N.
Sostituzioni nel settore C2C conservate di otoferlin causa DFNB9, una forma di
sordità non sindromica autosomica recessiva Neurobiol
Dis 2002; 10..: 157-64 [. ]
16. Rodríguez-Ballesteros
M, del Castillo FJ, Martin Y, Moreno-Pelayo MA, Morera C, Prieto F, Marco J,
Morant A, Gallo-Teran J, Morales-Angulo C, Navas C, Trinidad G, Tapia MC,
Moreno F , del Castillo I. neuropatia uditiva nei pazienti portatori di
mutazioni nel gene otoferlin (OTOF)Hum Mutat 2003; 22 :451-6 [… ]
17. Rodríguez-Ballesteros
M, Reynoso R, Olarte M, Villamar M, Morera C, Santarelli R, Arslan E, Meda C,
Curet C, Völter C, Sainz-Quevedo M, Castorina P, Ambrosetti U, Berrettini S,
Frei K, Tedin S, Smith J, Cruz Tapia M, L Cavallé, Gelvez N, Primignani P,
Gómez-Rosas E, Martín M, Moreno-Pelayo MA, Tamayo M, Moreno-Barral J, Moreno F,
del Castillo I. Uno studio multicentrico su … la prevalenza e lo
spettro di mutazioni nel gene otoferlin (OTOF) in soggetti con deficit uditivo
non sindromica e neuropatia uditiva Hum
Mutat 2008; 29 :823-31 [ ]
18. Rouillon
I, Marcolla A, Roux io, Marlin S, Feldmann D, Couderc R, Jonard L, Petit C,
Denoyelle F, Garabedian EN, Loundon N. risultati di impianto cocleare in due
bambini con mutazioni nel gene OTOF. Int J Pediatr ..
Otorhinolaryngol 2006; 70 :689-96 [ ]
19. Roux
Io, Safieddine S, Nouvian R, Grati M, Simmler MC, Bahloul A, Perfettini I, Le
Gall M, Rostaing P, Hamard G, Triller A, Avan P, Moser T, Petit C. Otoferlin,
difettoso in una sordità umana forma, è essenziale per esocitosi al nastro
sinapsi delle
cellule uditive 2006; 127 :277-89 [… ]
20. Schultz J, Milpetz F, Bork P, Ponting CP. SMART,
un semplice architettura modulare strumento di ricerca: individuazione dei
domini di segnalazione Proc Natl Acad Sci US
A. 1998; 95 :5857-64 [..PMC
libero ] [ ]
21. Schwander
M, Sczaniecka A, N Grillet, Bailey JS, Avenarius M, Najmabadi H, Steffy BM,
Federe GC, Lagler EA, Banan R, Hice R, Grabowski-Boase L, Keithley EM, Ryan AF,
Housley GD, Wiltshire T, RJ Smith, Tarantino LM, Muller U. Uno schermo genetica
avanti nei topi identifica i tratti recessivi sordità e rivela che pejvakin è
essenziale per la funzione delle cellule ciliate esterne J
Neurosci 2007; 27 :2163-75 [… ]
22. Shearer AE, DeLuca AP, Hildebrand MS, Taylor KR, Gurrola J,
Scherer S, Scheetz TE, RJ Smith.. Test genetico completo per
sordità ereditaria mediante sequenziamento massivamente paralleloProc Natl Acad
Sci US A. 2010; 107 :21104-9 [. PMC
libero ] [ ]
23. RJ
Smith, Bale JF, Bianco KR. … Perdita dell’udito neurosensoriale nei
bambini Lancet 2005; 365:879-90 [ ]
24. Starr A, Sininger Y, Inverno M, Derebery MJ, Oba S, Michalewski
HJ. . Sordità transitoria grazie alla sensibile alla temperatura
neuropatia uditiva Ascolta
Ear 1998; 19 :169-79 [.. ]
25. Tekin
M, Akcayoz D, Incesulu A. Una nuova mutazione missenso in un dominio C2 di
risultati OTOF in autosomica recessiva neuropatia uditiva Am J Med Genet
A. 2005; 138 :6-10 [.. ]
26. Varga R, Avenarius MR, Kelley PM, Keats BJ, Berlino CI, Hood LJ,
Morlet TG, Brashears SM, Starr A, Cohn ES, RJ Smith, Kimberling WJ. Mutazioni
OTOF rivelati da analisi genetiche di ascoltare famiglie di perdita tra cui un
sensibile allele neuropatia uditiva temperatura potenziale J Med
Genet 2006, 43 :576-81 [… PMC
libero ] [ ]
27. Varga R, Kelley PM, Keats BJ, Starr A, Leal SM, Cohn E, Kimberling
WJ. Non sindromica recessiva neuropatia uditiva è il risultato di
mutazioni nel otoferlin (OTOF) gene J Med
Genet 2003;40 :45-50 [… PMC
libero ] [ ]
28. Wang
Q, Lan L, L Yu, Guo M, Chen Z, Gu R. temperatura sensibile neuropatia
uditiva J Audiol Sp Pathol (cinese) 2006. 14. :21-6.
29. Wang
DY, Wang YC, Weil D, Zhao YL, Rao SQ, Zong L, Ji YB, Liu Q, Li JQ, Yang HM,
Shen Y, Benedetto-Alderfer C, Zheng QY, Petit C, Wang QJ. Screening
mutazioni del gene OTOF in pazienti cinesi con neuropatia uditiva, tra cui un caso
familiare di sensibile alla temperatura neuropatia uditiva BMC Med
Genet 2010; 11:… 79 [ PMC
articolo ] [ ]
30. Weiler
T, Bashir R, Anderson LV, Davison K, Moss JA, Britton S, Nylen E, Keers S,
Vafiadaki E, Greenberg CR, CR Bushby, Wrogemann K. mutazione identica nei
pazienti con distrofia muscolare dei cingoli di tipo 2B o miopatia di Miyoshi
suggerisce un ruolo per il gene modificatore (s) Hum Mol
Genet 1999; 8 :871-7 [… ]
31. Yasunaga S, M Grati, Chardenoux S, Smith TN, Friedman TB, Lalwani
AK, Wilcox ER, Petit C. OTOF codifica isoforme multiple lunghe
e corte:.. Prova genetica che quelli lunghi alla base recessiva sordità
DFNB9 Am J Hum Genet 2000; 67 :591-600 [. PMC
libero ] [ ]
32. Yasunaga
S, Grati M, Cohen-Salmon M, El-Amraoui A, Mustapha M, N Salem, El-Zir E,
Loiselet J, Petit C. Una mutazione in OTOF, codifica otoferlin, una proteina
FER-1-like, le cause DFNB9, una forma non sindromica sordità Nat
Genet 1999; 21 :363-9 [… ]
Cronologia delle
revisioni
·
14 giugno 2011 (cd) Revisione: Link a sentire gli annunci del
pannello di perdita / sordità in GeneTests Laboratory Directory disponibile
·
26 aprile 2011 (me) l’aggiornamento completo pubblicato dal vivo
·
29 febbraio 2008 (me) recensione scritta a vivere sito web
·
15 ottobre 2007 (rjhs) presentazione originale
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Hearing Loss and Deafness, DFNB1[GeneReviews<sup>®</sup>.
1993]
·
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Syndrome/DFNB4[GeneReviews<sup>®</sup>.
1993]
·
WFS1 -Related Disorders[GeneReviews<sup>®</sup>. 1993]
·
Review Hereditary deafness and phenotyping
in humans.[Br Med Bull.2002]
·
Review [Evaluation of a family with
sensorineural hearing loss due to the Q829X mutation in the OTOF gene].[Acta Otorrinolaringol Esp.2004]
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